[发明专利]一种腺病毒滴度的检测方法

权利要求书

1.一种腺病毒滴度的检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)腺病毒包装细胞培养板的制备：将对数生长期的细胞以2×10⁴个/0.1mL/孔的细胞密度铺到细胞培养板中，置培养箱中培养使细胞贴于孔底；

(2)接种腺病毒：将被检的腺病毒梯度稀释后接种到细胞中培养；

(3)病毒侵染：病毒接种后侵染细胞60min后，更换维持液；

(4)病毒滴度计算：计算病毒的TCID₅₀。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(1)中所述的腺病毒包装细胞为HEK293细胞。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(1)细胞培养板的制备为：HEK293细胞培养物应为偏酸性、澄清液体、上次传代后40～48小时用于病毒滴度测定用；镜检293细胞应呈三角形或多边形贴壁状，汇合度在60％～80％，具良好折光性；取足量293细胞培养物按常规传代方法将细胞收集，倒置显微镜下计数后，用完全培养液调整细胞浓度为2×10⁵个/mL；取适量96孔细胞培养板做好相应标记，各孔加入100uL细胞悬液，每孔细胞数为2×10⁴个，37℃，5％CO₂培养箱条件下培养过夜。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(2)接种腺病毒为：取待测供试品用不含血清的DMEM培养液进行梯度稀释，稀释范围可根据VP调整，稀释倍数最大不超过10倍，接种样品之间稀释倍数以2倍为宜；孵箱取出96孔板，小心吸出各孔内培养基吸出弃去，向各孔内加入最后8个稀释度供试品，200uL/孔，每个稀释度接种10个平行孔，第一列及第十二列的8个孔接种，第一列及第十二列的8个孔接种DMEM培养液，37℃，5％CO₂培养箱温育60分钟。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于步骤(3)病毒侵染为：60分钟后，小心吸出各孔培养液，加入200uL维持液，操作时从低浓度向高浓度孔操作，并且每个稀释度均需更换枪头，37℃，5％CO₂培养箱持续培养10天。