[发明专利]一种特殊糖肽富集和鉴定的方法在审
| 申请号： | 201410261978.3 | 申请日： | 2014-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN105277398A | 公开（公告）日： | 2016-01-27 |
| 发明（设计）人： | 张丽华;翁叶靖;蒋好;随志刚;杨开广;张玉奎 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大连化学物理研究所 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N1/40;G01N27/62 |
| 代理公司： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 21002 | 代理人： | 马驰 |
| 地址： | 116023 *** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 特殊 糖肽 富集 鉴定 方法 | ||
1.一种富集和鉴定特殊糖肽的方法，其特征在于：
1)首先通过糖肽富集技术从蛋白的酶解产物中得到糖肽；
2)然后利用标记试剂与糖肽的N端进行反应，待反应完成后，除去标记试剂，加入糖苷酶进行充分去糖基化，最后对其进行质谱鉴定。
2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：糖肽富集技术是亲水作用色谱法、酰肼化学法或凝集素富集法中的一种或二种以上。
3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：酶解产物是胰蛋白酶(trypsin)、丝氨酸蛋白酶(lys-c)或蛋白内切酶(glu-c)中的一种或二种以上对蛋白进行酶解后的产物。
4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：糖苷酶是肽N-糖苷酶A(PNGaseA)和肽N-糖苷酶F(PNGaseF)中的一种或二种。
5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：标记试剂是与α氨基发生高选择性反应同时生成酰胺键的试剂。
6.按照权利要求5所述的能与α氨基发生高选择性反应同时生成酰胺键的试剂包括：酸酐类试剂(如乙酸酐、丙酸酐、丁二酸酐)、羧基活化类试剂(如N-羟基丁二酰亚胺、4-二甲氨基吡啶)以及氨基酸类试剂(如精氨酸、赖氨酸、组氨酸)。
7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的质谱可以是飞行时间类质谱或离子阱类质谱中的一种或二种。
8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述糖肽的糖基化的天冬氨酸位于糖肽N末端。
9.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)为了提高质谱检测的灵敏度，首先通过糖肽富集技术从蛋白的酶解产物中得到糖肽，然后利用糖苷酶对糖肽进行充分的去糖基化，再利用糖肽富集技术获得未被去糖基化的糖肽。
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