[发明专利]耐辐射奇球菌蛋白酶PprI的酶活性启动和提高方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新发现的耐辐射奇球菌蛋白酶PprI，涉及金属离子对酶活性的启动作用、基因启动子对酶切效率的促进作用。

背景技术

蛋白酶是水解蛋白质肽键的一类酶的总称，可以催化蛋白质中肽键的水解。蛋白酶广泛存在于动物、植物和微生物中。到目前为止，国际市场上商品蛋白酶100种以上。由于动植物资源有限，工业上生产蛋白酶制剂主要来自微生物，利用枯草杆菌、酵母、霉菌、大肠杆菌等微生物提取制备。随着蛋白酶研究的深入，它的工业应用越来越引起了人们的广泛关注。

蛋白酶已广泛应用在毛皮、皮革、丝绸、医药、食品、酿造、石油钻井等领域。利用蛋白酶，皮革工业的脱毛软化，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用，例如用于消化不良、支气管炎、脉管炎等症状的治疗。加入蛋白酶的洗衣粉能高效去除衣物上的血渍和蛋白污物。另外，蛋白酶广泛应用于生化分子实验，作为蛋白质的手术刀，是生命科学研究不可或缺的。

耐辐射奇球菌是一种极端环境微生物，以对电离辐射、紫外射线、干燥和氧化压力等极端条件表现极强抗性而著称。它的这种超强抗性有一部分归功于其体内pprI基因（基因名dr_0167，NCBI-GeneID: 1798483）。它是在基因损伤修复中起整体调控作用。pprI基因表达的产物PprI蛋白（NCBI-GI: 15805204）由328个氨基酸组成，含3个功能结构域，分别是锌指-蛋白酶结构域，螺旋-转角-螺旋结构域，GAF结构域。但是至今为止，PprI的蛋白酶活性和酶底物从未被发现。

发明内容

本发明的目的是提供一种耐辐射奇球菌蛋白酶PprI的酶活性启动与提高方法。

耐辐射奇球菌蛋白酶PprI的酶活性优化方法，所述的蛋白酶PprI的酶活性启动需要Mn²⁺离子。

所述的Mn²⁺离子浓度为2.0-5.0 mM。

所述的蛋白酶PprI的反应缓冲液含100-200 mM NaCl、10-50mM Tris-HCl 8.0、1mM DTT、2.0-5.0 mM MnCl₂。

 所述的蛋白酶PprI酶活性的提高需要基因启动子。

所述的基因启动子为dr2340基因启动子和dr2574基因启动子。

本发明的有益效果：

    蛋白质的手术刀，是生命科学研究不可或缺的；本发明可以高效提高蛋白酶PprI的酶切活性，缩短反应时间。

附图说明

图1是不同金属离子对蛋白酶PprI的酶活性的SDS-PAGE图；

 其中，从左至右，分别是不加金属离子的对照反应；加EDTA的对照反应；

加Ca²⁺的反应；加Cu²⁺的反应；加Fe²⁺的反应；加Mg²⁺的反应；加Ni²⁺的反应；

加Mn²⁺的反应；加Zn²⁺的反应。

图2是ddrO基因启动子促进蛋白酶PprI的酶活性的SDS-PAGE图；

   其中，第1道为不加ddrO基因启动子的对照实验；第2到5道为ddrO基因启动子的量递增的反应，浓度范围从0.04μM/L到0.32μM/L。

图3是recA基因启动子促进蛋白酶PprI的酶活性的SDS-PAGE图。

其中，第1道为不加recA基因启动子的对照实验；第2到5道为recA基因启动子的量递增的反应，浓度范围从0.04μM/L到0.32μM/L。

 图4是非特异性DNA处理对照实验的SDS-PAGE图；

   其中，第1道为不加启动子的对照实验；第2道为加非特异性DNA的对照实

验，浓度为0.32μM/L。

具体实施方式