[发明专利]一种蚕沙药材的检测方法

权利要求书

1.一种蚕沙药材的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下对1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤：

精密称定1-脱氧野尻霉素对照品5-15mg，加水稀释制成每mL含0.1-0.5mg的对照品储备液；精密量取1mL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为1-3％的NaHCO₃溶液1-4mL以及1-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液1-4mL，混匀并于30-60℃进行水浴反应20-40min，随后以30-60％的乙腈定容至20-30mL，作为对照品溶液；

取待测蚕沙药材研细，并精密称取0.5-2.0g，加入用浓盐酸调pH值为3-4的水30-60mL，搅拌均匀，超声处理20-30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3-4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至10-20mL；将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水10mL溶解，超声处理1-5分钟，并加水定容至20-30mL，得到供试品储备液；精密量取1mL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为1-3％的NaHCO₃溶液1mL、以及1-3mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30℃进行水浴反应40min，随后以30-60％的乙腈定容至20-30mL，作为供试品溶液；

照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2％的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0-8min，A：B为25％：75％；8-40min，A：B为25％：75％→50％：50％；40-45min，A：B为50％：50％；45-46min，A：B为50％：50％→25％：75％；46-75min，A：B为25％：75％；控制流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000；

精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定。

2.根据权利要求1所述的蚕沙药材的检测方法，其特征在于，所述对1-脱氧野尻霉素的含量进行测定的步骤包括：

精密称定1-脱氧野尻霉素对照品10mg，加水稀释制成每mL含0.2mg的对照品储备液；精密量取1mL所述对照品储备液，并精密加入质量浓度为2％的NaHCO₃溶液1mL以及2mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30℃进行水浴反应40min，随后以50％的乙腈定容至25mL，作为对照品溶液；

取待测药材研细，并精密称取1g，加入用浓盐酸调pH值为3-4的水50mL，搅拌均匀，超声处理30min，并离心取上清液；残渣加pH值为3-4的水适量洗涤，离心合并上清液，并浓缩至20mL；将浓缩液置于阳离子交换树脂柱，先用水洗脱，收集并弃去水洗脱液，再用0.5M氨水洗脱，并收集氨水洗脱液，浓缩至近干，随后加水10mL溶解，超声处理2分钟，并加水定容至25mL，得到供试品储备液；精密量取1mL所述供试品储备液，依次加入质量浓度为2％的NaHCO₃溶液1mL、以及1mg/mL的芴甲氧羰酰氯乙腈溶液4mL，混匀并于30℃进行水浴反应40min，随后以50％的乙腈定容至25mL，作为供试品溶液；

照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛为流动相A、以0.2％的磷酸溶液为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0-8min，A：B为25％：75％；8-40min，A：B为25％：75％→50％：50％；40-45min，A：B为50％：50％；45-46min，A：B为50％：50％→25％：75％；46-75min，A：B为25％：75％；控制流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长263nm，理论板数按1-脱氧野尻霉素峰计算应不低于6000；

精密吸取所述对照品溶液和供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定。

3.根据权利要求1或2所述的蚕沙药材的检测方法，其特征在于，所述1-脱氧野尻霉素的含量测定步骤中，所述阳离子交换树脂柱为D001-CC型阳离子交换树脂柱，树脂体积为50mL，径高比为1：8。