[发明专利]一种合成利拉鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成利拉鲁肽的方法。

背景技术

利拉鲁肽，英文名为Liraglutide，是丹麦诺和诺德公司研制出的一种治疗II型糖尿病的药物。利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，其作为GLP-1受体激动剂能起到良好的降低血糖作用，肽序如下：

NH₂-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys(N^α-PAL-γ-Glu)-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH

利拉鲁肽与天然GLP-1分子结构相比有一个氨基酸差异，并增加了一个16碳棕榈酰脂肪酸侧链，与天然人GLP-1有97％同源性。与天然GLP-1不同的是，利拉鲁肽在人体中的药代动力学和药效动力学特点均适合每天一次的给药方案。皮下注射给药后，其作用时间延长的机理包括：使吸收减慢的自联作用、与白蛋白结合、对二肽基肽酶IV(DPP-IV)和中性内肽酶(NEP)具有更高的酶稳定性，从而具有较长的血浆半衰期。

在利拉鲁肽的现有合成方法中，诺和诺德公司主要是通过基因重组技术，利用酵母生产利拉鲁肽，但是国内无法得到酵母菌种进行生产。专利US6268343B1、US6458924B2以及文献“Journal of Medicinal Chemistry43，1664-1669，2000”均公开了利用中间体GLP-1(7-37)-OH和N^α-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu来制备利拉鲁肽的方法，但是这三种现有技术中，中间体GLP-1(7-37)-OH均需要反相HPLC纯化，再在液相条件下与N^α-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反应，并且由于GLP-1(7-37)-OH N端未保护以及侧链保护基全部脱除，会导致产生许多杂质，难以纯化，操作繁琐，周期长，废液多，不利于环保，并且两步纯化，需花费大量乙腈，成本高昂，不利于大规模生产等。

中国专利CN102286092A公开了一种全合成方法，采用2-CTC树脂或王树脂，按照利拉鲁肽肽序逐个偶联氨基酸，最后经过反向纯化得到利拉鲁肽，其不需要两步纯化而且杂质较少，优于上述几种现有制备方法。但是，这种方法需要逐个偶联氨基酸，合成周期长，总收率较低，仅为15％左右(参见CN102286092A实施例12-14)，仍需要进一步提高。

为了解决上述问题，申请号为201210369966.3的中国专利公开了一种合成利拉鲁肽的方法，其按照利拉鲁肽主链N端至C端的氨基酸顺序，先合成第1至第4氨基酸、第5至第10氨基酸、第11至第16氨基酸、第17至第24氨基酸以及第25至第31氨基酸的5个多肽片段，然后偶联5个多肽片段合成利拉鲁肽，缩短合成周期，提高利拉鲁肽的纯化后总收率超过30％，纯度超过99％。但是，该方法需要分别和树脂载体合成5个片段，然后再进行偶联，其中涉及到多次的连接和裂解树脂载体，在操作程度上并不简便，而且偶联和裂解树脂载体均需要花费不少时间，且耗费过多的树脂载体。此外，该专利在杂质含量检测方面并未公开对利拉鲁肽品质影响较大的最大单一杂质的含量。

在多肽合成领域，不同的合成策略对最终产品的纯度、最大单一杂质含量和收率有很大影响，如何在保证纯度和收率的前提下，尽可能的降低合成工艺的复杂程度、最大单一杂质以及缩短合成周期，是当下技术人员的研究重点。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成利拉鲁肽的方法，使得本发明所述方法在保证其总收率和纯度的前提下，降低合成方法的复杂程度和最大单一杂质，缩短合成周期。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种合成利拉鲁肽的方法，包括以下步骤：

步骤1、合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His侧链上以及Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段1；

合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段2；

合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端偶联有树脂载体、在Gln侧链上、Glu侧链上、Trp侧链上、Arg侧链上偶联有保护基以及在Lys侧链上偶联有N^α-PAL-γ-Glu(α-OtBu)的多肽片段3；