[发明专利]检测转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的引物对

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的引物对。

背景技术

杂草是农作物生产的大害，自1942年出现近代杂草防治技术以来，化学除草剂有了很大的发展。草甘膦类除草剂是一种广谱性、非选择性除草剂，它通过抑制EPSPS(5-烯醇丙酮酰草酸-3-磷酸合酶，是植物体内芳香族氨基酸合成途径中的一个重要酶)的活性，阻断了植物莽草酸途径的生物合成，强烈抑制细胞分裂，对许多一年生和多年生杂草都具有强烈的抑制作用。由于草甘膦易于被微生物分解，在土壤中无残毒，对动物无毒害，自从1976年Roundup研制成功以来，得到了广泛的应用。

但是，由于玉米等禾本科作物对草甘膦敏感，使其应用受到限制。因此，将耐草甘膦基因转入玉米，不但可以扩大草甘膦的使用范围，而且可降低生产成本，保护玉米免受药害，最终达到增产增收的目的。尽管耐草甘膦基因G2-aroA已在2004年被发现，并在宿主荧光假单胞菌G2及大肠杆菌中都能高效表达，表现高耐草甘膦的特性(Yichen Sun,Min Lin and Yiping Wang.Novel AroA with high tolerance to Glyposate,encoded by a gene of Pseudomonas putida4G-1isolated from an extremelypolluted environment in China.Aplied and environmental microbiology.2005,71(8):4771-4776)，但其在植物，特别是重要的粮食作物中由于表达量较低而没有被利用，因此急需对其在植物中的应用进行研究，如进行密码子优化，以加速其应用到农业生产中。

本发明的发明人所在团队在前期工作中，将耐草甘膦基因G2-aroA经过密码子优化后转入玉米中，获得转基因玉米，并经实验证实与密码子优化前相比，密码子优化后的转基因玉米整体表现出G2-aroA蛋白的表达量明显提高，且对草甘膦的耐受性也明显提高(中国专利，申请号201210107071.2，授权公告号CN102676553B)。

发明内容

本发明的一个目的是提供用于检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的引物对。

在本发明中，所述转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C具体为保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)的保藏编号为CGMCC No.9154的玉米株系。

本发明所提供的用于检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的引物对，具体由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成。

在本发明中，所述引物对中两个单链DNA分子既可以单独包装，也可以等摩尔混合包装。

其中，所述序列1由26个核苷酸组成；序列2由26个核苷酸组成。

所述引物对在制备用于检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明再一个目的是提供一种用于检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的试剂盒。

本发明所提供的用于检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的试剂盒，具体可包含有如上所述的引物对。

所述试剂盒还可含有由序列表中序列4和序列5所示的两条单链DNA分子组成的内参引物对(针对玉米中内参基因ADH设计的引物对)。

所述试剂盒中还可含有PCR反应所需的常规试剂，如DNA聚合酶、dNTP等。

所述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述试剂盒的制备方法，为如下(a1)或(a2)：

(a1)包括如下步骤：将所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装；

(a2)包括如下步骤：将所述引物对的两条单链DNA分子，以及所述内参引物对的两条单链DNA分子分别单独包装。

所述引物对，或所述试剂盒，在检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种检测或辅助检测待测玉米是否为转G2-aroA基因耐除草剂玉米G1105E-823C的方法。