[发明专利]一种控制轮虫携带的总细菌数的方法

权利要求书

1.一种控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)制备蛭弧菌稀释液；

(2)将步骤(1)制备的蛭弧菌稀释液与保护剂进行混合，即得到蛭弧菌制剂；

(3)含轮虫的水样的预处理；

(4)将步骤(2)获得的蛭弧菌制剂与步骤(3)的含轮虫的水样进行混合。

2.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDS02，为2009年8月7日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M209170。

3.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌稀释液的浓度为2×10³～2×10⁶PFU/mL。

4.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

所述的保护剂为质量体积比5～25％谷氨酸钠和质量体积比5～25％蔗糖的混合溶液。

5.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

步骤(2)中所述的蛭弧菌稀释液与保护剂进行混合按照蛭弧菌稀释液与保护剂进行体积比1：1混合。

6.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

所述的含轮虫的水样中的轮虫数目在20～25个/mL。

7.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

步骤(4)中所述的混合是将蛭弧菌制剂与含轮虫的水样按照体积比1:(10～100)混合。

8.根据权利要求1所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

所述的蛭弧菌稀释液通过以下步骤获得：

①宿主菌浓缩液的制备：挑取大肠杆菌单菌落，接种于营养肉汤液体培养基中，培养，得到培养液，然后将培养液离心，弃上清，每100mL培养液收集的沉淀用2～3mL DNB液体培养基悬浮，得到宿主菌浓缩液，4℃保存备用；

②蛭弧菌稀释液的制备：按照蛭弧菌：宿主浓缩液：DNB液体培养基的体积比1:1:50的比例进行混合，恒温培养，每24h添加一次宿主浓缩液，培养48h，得到培养液；将培养液离心，取上清液过滤，滤液使用质量体积比1.5％盐度的灭菌蒸馏水调整其浓度，制备得到2×10³～2×10⁶PFU/mL的蛭弧菌稀释液。

9.根据权利要求8所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

步骤①中所述的营养肉汤液体培养基为营养肉汤18g/L，pH7.2，121℃高压灭菌15min后保存备用；

步骤①中所述的培养的条件为200rpm、28℃培养18h；

步骤①中所述的离心的条件为4℃、6000rpm离心20min；

步骤②中所述的恒温培养的条件为230rpm、28℃培养；

步骤②中所述的将培养液离心的条件为6000rpm、4℃离心20min；

步骤②中所述的过滤为用0.45μm醋酸纤维素膜进行过滤；

步骤②中所述的质量体积比1.5％盐度的灭菌蒸馏水用海水晶制备得到。

10.根据权利要求8所述的控制轮虫携带的总细菌数的方法，其特征在于：

步骤①和②中所述的DNB液体培养基，通过如下步骤制备：称取0.8g/L的营养肉汤，0.5g/L的酪蛋白酸水解物和0.1g/L的酵母提取物，15g/L海水晶，用蒸馏水溶解混匀，调pH值至7.2～7.6，121℃0.1MPa条件下处理20min保存备用。