[发明专利]一种控制轮虫携带的总细菌数的方法无效
申请号: | 201410269825.3 | 申请日: | 2014-06-17 |
公开(公告)号: | CN104126530A | 公开(公告)日: | 2014-11-05 |
发明(设计)人: | 蔡俊鹏;孙秋平 | 申请(专利权)人: | 华南理工大学 |
主分类号: | A01K61/00 | 分类号: | A01K61/00;C02F3/34;A61K35/74;C12N1/20;C12R1/01;A61P31/04 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 裘晖 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 控制 轮虫 携带 细菌 方法 | ||
技术领域
本发明属于蛭弧菌技术领域,特别涉及一种控制轮虫携带的总细菌数的方法。
背景技术
轮虫(英文名rotifer)常见于世界各处的淡水中,同时在咸水、咸淡水或海水中也多有发现。多数自由游泳,有些寄生。常见的有旋轮属、猪吻轮属、腔轮属和水轮属等,为目前大规模工业水产养殖中,许多海洋鱼类和虾类不可缺少的活食用生物。其营养方式单一,成活率高、来源广泛,同时又具备营养丰富、方便水产动物摄食等特点,从而被广泛应用于水产养殖业中,重点用于饲喂水产生物幼体。与有机传统饵料相比,使用轮虫投喂水产生物幼体具有成本低、幼体成活比高等优势。但是,如果轮虫自身携带过多细菌,那么将对轮虫的生存及养殖应用造成巨大影响及危害。总细菌数目过多,潜在的致病菌存在的可能性也就更大,其中可能存在的致病菌的种类和数目也会增加,会给对其进行虑食的水产生物幼体造成病害。养殖户在水产生物育苗的过程中,会对引入的轮虫等饵料进行简单的过滤,或对其施用消毒剂以达到消毒的目的,这不但影响了轮虫的活性、可能还会引入新的细菌,更有可能在一定程度上杀死轮虫等浮游生物,同时破坏了养殖的水生生态环境,对水产生物的育苗产生不利影响。
因此,在使用轮虫作为优质饵料对水产生物育苗时,都应当对于其中携带的全部细菌引起重视。国内的许多研究都致力于将蛭弧菌制剂应用于控制病原菌,利用蛭弧菌天然的生物裂解活性,将蛭弧菌制剂施用于水体当中,可有效控制水体中的总细菌数目,从而降低其对于水产生物造成侵害的可能,从源头上控制水产生物病害的发生。目前将蛭弧菌制剂应用于控制水生浮游生物轮虫所携带的的总菌尚无报道。为了有效保障养殖水体及活生物饵料轮虫等的安全性,简单的消毒处理方式已无法满足需求。
应用蛭弧菌制剂控制轮虫所携带的的总菌,从源头上对水产养殖中存在的可能致病细菌进行防控,以形成具有疾病防预功能的养殖生态系统,具有十分重要的意义。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足,本发明的首要目的在于提供一种控制轮虫携带的总细菌数的方法。该方法创新性提出了一种蛭弧菌制剂在控制有益浮游生物轮虫所携带的总菌的方式;并可以适当的延长其制剂中的菌体活性。
本发明的目的通过下述技术方案实现:一种控制轮虫携带的总细菌数的方法,包括以下步骤:
(1)制备蛭弧菌稀释液;
(2)将步骤(1)制备的蛭弧菌稀释液与保护剂进行混合,即得到蛭弧菌制剂;
(3)含轮虫的水样的预处理;
(4)将步骤(2)获得的蛭弧菌制剂与步骤(3)的含轮虫的水样进行混合。
所述的蛭弧菌优选为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDS02,为2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M209170;对所述的蛭弧菌进行进行负染后于电子显微镜下观察形态可知:BDS02呈单细胞,弧形,大小为0.65×0.2μm,端生鞭毛,鞭毛长度为1.8μm;所述蛭弧菌BDS02用双层平板培养的方法于28℃培养四天可形成直径1~2mm的透明圆形噬菌斑;
所述的蛭弧菌稀释液优选通过以下步骤获得:
①宿主菌浓缩液的制备:挑取大肠杆菌单菌落(大肠杆菌E.coli,购于广东省微生物所菌种保藏中心,编号为GIM1.355),接种于营养肉汤液体培养基中,培养,得到培养液,然后将培养液离心,弃上清,每100mL培养液收集的沉淀用2~3mL DNB(diluted nutrient broth)液体培养基悬浮,得到宿主菌浓缩液,4℃保存备用;
②蛭弧菌稀释液的制备:按照蛭弧菌:宿主浓缩液:DNB液体培养基的体积比1:1:50的比例进行混合,恒温培养,每24h添加一次宿主浓缩液,培养48h,得到培养液;将培养液离心,取上清液过滤,滤液使用质量体积比(g/mL)1.5%盐度的灭菌蒸馏水调整其浓度,制备得到2×103~2×106PFU(plaque-forming unit)/mL的蛭弧菌稀释液;
所述的蛭弧菌优选为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDS02,为2009年8月7日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M209170;
步骤①中所述的营养肉汤液体培养基优选为营养肉汤18g/L,pH7.2,121℃高压灭菌15min后保存备用;
步骤①中所述的培养的条件优选为200rpm、28℃培养18h;
步骤①中所述的离心的条件优选为4℃、6000rpm离心20min;
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