[发明专利]一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法

权利要求书

1.一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法，用于非疾病诊断目的，包括以下环节：

(1)基因特异性引物的设计:

针对CYP2A6基因设计的序列特异性引物探针组合，序列如下:

上游引物:5’-TCCCACCCTACTCCCTCTCTC-3’

下游引物:5’-GGAGGTGAACGCGGGA-3’

探针:5’-FAM-TGGAGACAGGCCAGGGGGCG-BHQ2-3’

针对ALB基因设计的序列特异性引物探针组合，序列如下:

上游引物:5’-TGTTGCATGAGAAAACGCCA-3’

下游引物:5’-GTCGCCTGTTCACCAAGGAT-3’

探针:5’-HEX-AGTGACAGAGTCACCAAATGCTGCACA-BHQ2-3’

其中，FAM为6-carboxyfluorescein；HEX为6-carboxy-hexachlorofluorescein；BHQ2为Black Hole Quencher-2；

(2)模板的制备:提取待测样本的基因组DNA；

(3)实时定量PCR:

以反应体系总量20μL计，在同一个反应体系中，加入CYP2A6基因特异性上游引物250nM-500nM、下游引物250nM-500nM、探针100nM-200nM、以及ALB基因特异性上游引物250nM-500nM、下游引物250nM-500nM、探针100nM-200nM、2×Mastermix10μL、待测样本的基因组DNA10-50ng，H₂O补足体积20μL；

(4)结果判定:将配制好的反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增，根据仪器给出的两基因的扩增指标进行结果判定。

2.根据权利要求1所述的基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法，其特征在于，荧光实时定量PCR仪上进行的扩增过程的扩增参数为：95℃，2～15min，不循环；95℃，5～10sec，60℃，20-30sec，68℃，20～30sec，共计35～40个循环。

3.一种用于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1中所述的针对CYP2A6基因设计的序列特异性引物探针组合、针对ALB基因设计的序列特异性引物探针组合、以及2×Mastermix和H₂O。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：以试剂盒中的试剂总量20μL计，CYP2A6基因特异性上游引物250nM-500nM、下游引物250nM-500nM、探针100nM-200nM、以及ALB基因特异性上游引物250nM-500nM、下游引物250nM-500nM、探针100nM-200nM、2×Mastermix10μL，H₂O补足体积20μL。