[发明专利]检测奶牛子宫内膜细胞炎性反应的荧光定量PCR试剂盒及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种检测奶牛子宫内膜细胞炎性反应的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括PCR反应液、Taq DNA 聚合酶混合物、 SYBR Green染料和两对引物；所述引物序列为：

引物1：上游引物序列为5’-TATGACCAGGGACCAGGTAC-3’，下游引物序列为5’- CTCTGCCCTTAGGGACTCACAG -3’；

引物2：上游引物序列为5’-ATCGGCAATGAGCGGTTCC-3’，下游引物序列为5’- GTGTTGGCGTAGAGGTCCTTG -3’。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述牛为奶牛。

3.一种奶牛子宫内膜细胞炎性反应的相对定量检测方法，是以奶牛子宫内膜细胞中mRNA反转录的cDNA为模板，利用引物1、2和SYBR Green染料进行实时荧光定量PCR，根据扩增曲线判定结果：当引物1扩增基因的表达量相对于引物2扩增基因的表达量>5倍，则判断为奶牛隐性子宫内膜炎为阳性；反之则为阴性。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应条件为：95℃总变性2min；PCR反应39个循环，其循环过程为95℃变性20s、60.5℃退火30s、72℃延伸30s，每个循环后检测荧光信号值。

5.权利要求1或2所述的试剂盒在离体奶牛子宫内膜细胞炎性反应检测和鉴定奶牛隐性子宫内膜炎中的应用。