[发明专利]一种中链烷烃的生产方法

权利要求书

1.一种中链烷烃的生产方法，其特征在于，包括：

步骤1、首先将来自大肠杆菌K12菌株中的酰基辅酶A合成酶基因fadD克隆至原核表达载体，得到重组质粒1，经IPTG诱导，可以通过外源性流加C14:0/C16:0等中链脂肪酸的方式，催化脂肪酸生成代谢产物酯酰辅酶A。

步骤2、再将不动杆菌中的酰基辅酶A还原酶基因acr克隆至原核表达载体，得到重组质粒2，经IPTG诱导，可以催化细胞中积累的酯酰辅酶A还原为C14/C16的脂肪醛。

步骤3、最后将念珠藻中的醛脱羰基酶基因dc克隆至原核表达载体，得到重组质粒3，经IPTG诱导，可以催化脂肪醛脱去羰基，生成烷烃。

步骤4、将得到的重组质粒1/3共同转至BL21(DE3)中，经外源性流加C14:0/C16:0等中链脂肪酸与IPTG诱导表达后，可以生产中链烷烃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的来自大肠杆菌中酰基辅酶A合成酶基因fadD的核酸序列如序列1所示，各自所编码的氨基酸序列如序列2所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将fadD基因克隆至双启动子表达载体pACYCDuet-1，得到重组质粒pACYCDuet-fadD，质粒1，其中酰基辅酶A合成酶基因置于T₇promoter1下游，由T₇启动子驱动表达。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述的来自不动杆菌中酰基辅酶A还原酶基因acr的核酸序列如序列3所示，各自所编码的氨基酸序列如序列4所示。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述acr基因克隆至双启动子表达载体pETDuet-1，得到重组质粒pETDuet-acr，质粒2，其中酰基辅酶A还原酶基因置于T₇promoter1下游，由T₇启动子驱动表达。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述的来自念珠藻中醛脱羰基酶基因dc的核酸序列如序列5所示，各自所编码的氨基酸序列如序列6所示。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述dc基因克隆至双启动子表达载体pETDuet-acr，得到重组质粒pETDuet-acr-dc，质粒3，其中醛脱羰基酶基因置于T₇promoter1下游，由T₇启动子驱动表达。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，已转入重组质粒1/3的重组大肠杆菌，经添加0.4mM IPTG诱导酰基辅酶A合成酶、酰基辅酶A还原酶、醛脱氢酶表达后，可经外源性流加C14:0/C16:0等中链脂肪酸的方式，催化脂肪酸代谢生成C13/C15等碳链长度不等的中链烷烃。