[发明专利]一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法

权利要求书

1.一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法，包括如下步骤： 

(1)取2mL的离心管，加入1～30μL10^-5M的DNA1和10μL pH5.2的500mM的醋酸缓冲溶液，和10μL10mM的三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)反应1h，用以活化巯基；然后，另取2mL离心管依次加入直径15nm，1mL的Au@PtNPs和100μL10^-4M的硫堇溶液反应0.5h，使硫堇吸附在金-铂纳米粒子上；将吸附了硫堇的Au@PtNPs加入到活化好的巯基DNA1中，放入37℃摇床轻摇反应8～32h；使巯基DNA1与Au@PtNPs连接起来；再向体系中加入0.1M NaCl放置24h后在15000转速下，离心30min，得到红色沉淀，并用10mMpH8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次，分散在10mM，pH8.0的磷酸缓冲溶液中得到DNA1/Th/Au@PtNPs电化学探针； 

(2)用NaCO₃将CNPs调节pH至7.0，移至2mL离心管在15000转速下离心10min；离心产物用0.01M，pH7.0磷酸缓冲溶液洗涤3次；将产物用0.01M，pH7.0的磷酸缓冲溶液分散，取10μL滴在金电极表面得碳纳米粒子修饰金电极(CNPs/GE)； 

(3)取5～40μL10^-5M的DNA2加入电化学探针(DNA1/Th/Au@PtNPs)溶液中，反应0.5～4h后，14000转速下离心30min，用10mM，pH8.0磷酸缓冲溶液洗涤三次，再用1mL磷酸缓冲溶液分散；在2mL离心管中加入20μL上述溶液，再加入2～20μL一定浓度的多巴胺，反应30min后将碳纳米粒子修饰金电极插入反应10～60min，用磷酸缓冲溶液冲洗后测定电化学信号； 

所述的DNA1的部分序列为：5’-GTG TTC TCT GGC GCA CAC AGA GAC ACA GAA TGA GGC CC-HS-3’； 

所述的DNA2的部分序列为：5’-GTC TCT GTG TGC GCC AGA GAA CAC TGG GGC AGA TAT GGG CCA GCA CAG AAT GAG GCC C-3’。 

2.根据权利要求1所述的测定电化学信号，其特征在于：以上述修饰金电极作为工作电极，将电极插入0.1M，pH7.4的磷酸缓冲溶液中用循环伏安法或微分脉冲伏安法(DPV)测电信号，电位增量0.001mV，脉冲宽度0.05s，脉冲周期0.2s。 

3.根据权利要求1所述的碳纳米粒子的制备，其特征在于：在100mL圆底烧瓶中加入10～120mL8M的HNO₃和0.3g活性炭，加热沸腾后，继续回流2～24h，即得。 

4.根据权利要求1所述的一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法在检测多巴胺含量中的应用。