[发明专利]一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学和电化学领域，具体涉及一种性检测多巴胺的电化学方法。 

背景技术

多巴胺(DA)是一重要的信息传递物质，其含量的改变可导致一些重要疾病如帕金森氏症等。因此，多巴胺的测定一直是分析化学、生物和医学领域的研究热点。电化学测定多巴胺有较高的灵敏度，但由于大量抗坏血酸(AA)与多巴胺共存于脑内，其在固体电极上的氧化电位与多巴胺重叠，因而严重干扰多巴胺含量的测定。 

近年来，提出了一些基于适体技术检测多巴胺的方法。如光度法(Yu Zheng,Yong Wang,Xiurong Yang,Aptamer-based colorimetric biosensing of dopamine using unmodified gold nanoparticles.Sensors and Actuators B,156(2011)95-99)、荧光法(Qin Mu,Hu Xu,Yan Li,Shijian Ma,Xinhua Zhong,Adenosine capped QDs based fluorescent sensor for detection of dopamine with high selectivity and sensitivity.Analyst,139(2014)93-98)、酶联免疫方法(Hoyoung Park,Insook Rhee Paeng,Development of direct competitive enzyme-linked aptamer assay for determination of dopamine in serum.Analytica Chimica Acta,685(2011)65-73；Eunhye Kim,Insook Rhee Paeng,Advantageous sensitivity in the DNA homolog of the RNA dopamine aptamer.Journal of Immunoassay and Immunochemistry,35(2014)83-100)等，然而这些检测方法大都灵敏度低，操作繁琐，而且耗时较多。因此，必须发展一种简单，低成本，快速的检测方法用于多巴胺的分析检测。 

发明内容

一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法：将电化学标记物硫堇吸附在金-铂纳米粒子(Au@PtNPs)表面，再将巯基DNA1固定在Au@PtNPs表面，得电化学探针(DNA1/Th/Au@PtNPs)；再将电化学探针溶液中加入多巴胺适体链DNA2，DNA1与DNA2发生互补配对，得DNA2修饰的电化学探针(DNA2/DNA1/Th/Au@PtNPs)；当向DNA2修饰的探针溶液中加入多巴胺后，适体链DNA2与多巴胺结合，导致重新生成了电化学探针DNA1/Th/Au@PtNPs；然后将碳纳米粒子修饰金电极(CNPs/GE)浸入重新生成的电化学探针DNA1/Th/Au@PtNPs溶液中，由于碳纳米粒子与单链DNA1的吸附作用，电化学探针吸附于电极表面，测电化学信号，通过电化学信号强弱实现了电化学方法对多巴胺的定量测定。 

本发明是通过以下措施来实现的：一种基于适体识别作用电化学测定多巴胺的方法，其特征是包括以下步骤： 

(1)制备电化学探针； 

(2)制备碳纳米粒子修饰金电极； 

(3)电化学检测多巴胺。 

优选的，本发明所述的电化学探针制备包括以下步骤：取2mL的离心管，加入10μL10^-5M的DNA1和10μL pH5.2500mM的醋酸缓冲溶液，和10μL10mM的三(2-羧乙基)膦盐酸盐(TCEP)反应1h，用以活化巯基。然后，另取2mL离心管依次加入直径15nm1mLAu@PtNPs和100μL10^-4M的硫堇溶液反应0.5h，使硫堇吸附在金-铂纳米粒子上。将吸附了硫堇的Au@PtNPs加入到活化好的巯基DNA1中，放入37℃摇床轻摇反应16h。使巯基DNA1与Au@PtNPs通过Au-S键连接起来。再向体系中加入0.1M NaCl放置24h后在15000转速下，离心30min，得到红色沉淀，并用10mM pH8.0的磷酸缓冲溶液洗涤三次，分散在10mM pH8.0的磷酸缓冲溶液中得到DNA1/Th/Au@PtNPs电化学探针，4℃避光保存。