[发明专利]利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法

说明书

本发明提供一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法，本发明首先利用生物学特征差别较大的5个杏品种进行了大量引物的筛选，从190对SSR引物中筛选出38对多态性好、主带清晰的引物进行样品的聚丙烯酰胺凝胶分析，最后又从6％聚丙烯酰氨凝胶电泳胶图中选出特异带清晰、非特异带少、多态性高的10个SSR标记的图谱进行读带分析。通过对读带数据的分析，最终筛选出鉴别效率最高的一个引物组合，由3对引物组成(PSSR1、PSSR2和PSSR3，引物序列如Seq ID No.1‑6所示)，可将124个杏品种一一区别开来。本发明的利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法具有快速、准确、低成本、操作简单、节约人力、物力及土地资源等优点，具有十分广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法。

背景技术

杏原产于中国，据不完全统计，我国已有2000余个品种和类型，近几年又育成和引进许多新品种。由于品种对不同产区的适应性和市场对品种多样性的需求，不同产地也就形成了不同的主栽品种。杏品种间在植物学形态上差异较小，有许多品种必须靠果实性状才能进行鉴别，而杏树定植后3～4年才能结果，这大大限制了生产上对优良品种的准确有效地选择，进而影响优良品种的增产潜力。

分子标记技术的发展，为品种的早期鉴定提供了可能。SSR(Simple SequenceRepeats)分子标记具有数量丰、分布于整个基因组、等位变异高、共显性、检测简单、结果稳定可靠等优点。目前，杏(Prunus armeniaca L.)植物材料中也开发了一些SSR引物，并已应用于遗传多样性、品种进化分析和遗传图谱的构建等方面，但利用SSR标记构建杏品种指纹图谱和品种鉴定的研究还未见报道。

选择合适的SSR引物是该项工作得以顺利开展的前提和关键之一。从理论上讲，任一SSR标记都可进行杏种质鉴定，但在实际操作中，有一些SSR引物不够稳定，容易出现杂带或扩增效果差。因此，开发合适的用于杏品种鉴定的SSR分子标记成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用SSR分子标记鉴定杏品种的方法。

为了实现本发明目的，本发明首先利用生物学特征差别较大的5个杏品种进行了大量引物的筛选，从已发表的在桃、杏、樱桃等核果类果树材料上开发出的190对SSR引物中筛选出38对多态性好、主带清晰的引物对样品进行PCR扩增，再对扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶分析，最后又从6％聚丙烯酰氨凝胶电泳胶图中选出特异带清晰、非特异带少、多态性高的10个SSR标记的图谱进行读带分析。通过对读带数据的分析，最终筛选出鉴别效率最高的一个引物组合，由3对引物组成(PSSR1、PSSR2和PSSR3，引物序列如Seq ID No.1-6所示)，可将124个杏品种一一区别开来。

杏品种SSR分子标记PSSR1，用于PCR扩增分子标记PSSR1的引物对为：

上游引物PSSR1F：5'-CAGAGTGCCCTCAGAGATTTG-3'和

下游引物PSSR1R：5'-TCCGTCGTCTTCACTGATTT-3'。

杏品种SSR分子标记PSSR2，用于PCR扩增分子标记PSSR2的引物对为：

上游引物PSSR2F：5'-CATGAACAGGGTCAAAAGCA-3'和

下游引物PSSR2R：5'-TATATCCTTACGCGGCCTCA-3'。

杏品种SSR分子标记PSSR3，用于PCR扩增分子标记PSSR3的引物对为：

上游引物PSSR3F：5'-CTGCTCTCACTCAACTCAATGC-3'和

下游引物PSSR3R：5'-CTCCCCTACCCCTCTGTATCTC-3'。