[发明专利]人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8、其制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程及噬菌体表面展示技术，具体地说，涉及人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8、其制备方法及应用。

背景技术

H7N9禽流感是由H7N9禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。自2013年2月以来，上海市、安徽省、江苏省先后发生不明原因重症肺炎病例。患者一般表现为流感样症状，如发热，咳嗽，少痰，可伴有头痛、肌肉酸痛和全身不适。重症患者病情发展迅速，表现为重症肺炎，体温大多持续在39℃以上，出现呼吸困难，可伴有咯血痰；可快速发展出现急性呼吸窘迫综合征、纵隔气肿、脓毒症、休克、意识障碍及急性肾损伤等，死亡率较高。

由H7N9病毒引起的急性呼吸道传染病目前没有相应的疫苗和特异性药物，因此制备高效、价廉、副反应小的被动免疫制剂成为研究的热点。利用含有特异性抗体的人源或动物血清免疫球蛋白来预防和治疗传染病由来已久。单克隆抗体的体外抗病毒中和活性和体内保护机体抵抗病毒攻击已获得许多实验证明，如汉坦病毒、麻疹病毒、RSV病毒、狂犬病毒等中和性单克隆抗体可以在体内100％保护动物免受病毒攻击。

免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)作为抗体成分主要来自捐献者(恢复期病人)免疫血清，从获得阳性血清到通过安全性检测耗时较长，且需投入大量的人力和财力，这就使其大量制备受到限制，同时由于抗体主要来源于血清，因此容易发生血源性传播疾病的感染。而使用人源基因工程产品替代血制品则可克服这些缺陷，随着人源基因工程抗体研究的不断深入，给这一领域的生物制品发展带来了新的希望和广阔前景。

90年代初兴起的噬菌体抗体基因库技术(Barbas,C.F.等,1991)和整个基因工程抗体技术研究领域的发展，极大促进了人源或基因工程抗体的开发研究，并已由基础研究阶段步入实质性应用研究和开发阶段。人源抗病毒基因工程抗体，尤其是人源全抗体的研究成功，给各种病毒性传染病的特异性预防和治疗开辟了新思路，并在抗病毒感染生物医药领域中逐渐开发出一类新的抗病毒药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8、其制备方法及应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8或其活性片段，其轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3以及重链高变区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列如表1所示：

表1轻链和重链高变区的氨基酸序列

前述的中和性抗体H8，i)其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；ii)其重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNo.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本发明中所述的人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8的活性片段是指能够与抗原结合的人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8的Fab段。

本发明还提供编码所述人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8的基因。其中，编码轻链可变区和编码重链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示。

本发明还提供含有编码所述人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体H8的基因的载体及宿主细胞。

本发明还提供一种制备人源抗H7N9禽流感病毒中和性抗体方法，利用噬菌体表面展示技术，采集多个H7N9禽流感病人恢复期外周血淋巴细胞，通过基因工程方法构建了人源抗H7N9禽流感病毒基因工程抗体文库，并筛选获得特异性抗H7N9禽流感病毒的基因工程抗体Fab段。

该抗体是由存在于抗体轻链和重链基因可变区中的高变区(CDRs)特异性基因序列决定的，并能够在原核细胞中获得有效表达的特异性结合H7N9禽流感病毒的功能性抗体。它特异性识别H7N9禽流感病毒颗粒抗原，与H7N9禽流感病毒具有明显的酶联免疫(ELISA)反应和抗H7N9禽流感病毒感染的中和活性功能。