[发明专利]一种构建高产5‑氨基乙酰丙酸大肠杆菌工程菌株的方法有效
| 申请号： | 201410274445.9 | 申请日： | 2014-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN104004701B | 公开（公告）日： | 2017-02-15 |
| 发明（设计）人： | 陈坚;康振;堵国成;张俊丽 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 何自刚,王玉松 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 高产 氨基 乙酰 丙酸 大肠杆菌 工程 菌株 方法 | ||
1.一种高产5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，在表达C5途径基因hemL和hemA的基础上，共表达编码尿卟啉原III合酶的基因hemD和/或粪卟啉原III氧化酶的基因hemF。
2.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，所述hemL的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，hemA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，所述hemD的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
4.根据权利要求1所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，所述hemF的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
5.根据权利要求1-4任一所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，以大肠杆菌DH5α、JM109、W3110或BL21(DE3)为表达宿主。
6.根据权利要求1-4所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，所述hemL与hemA以pACYCDuet-1为表达载体进行串联表达，得到表达载体pACYCDuet-1-hemLA。
7.根据权利要求1-4所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，单独或串联表达hemD和hemF时，所用表达载体是pUC18、pUC19、pCL1920、pCDFDuet-1或pET系列质粒。
8.根据权利要求7所述的大肠杆菌工程菌株，其特征在于，以pCDFDuet-1为表达载体。
9.一种构建权利要求1所述大肠杆菌工程菌株的方法，利用pACYCDuet-1表达hemL和hemA，以pCDFDuet-1表达编码尿卟啉原III合酶的基因hemD和/或粪卟啉原III氧化酶的基因hemF，转化筛选获得高产5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌工程菌株Escherichia coli BL21(DE3)/pACYCDuet-1-hemL-hemA pCDFDuet-1-hemD-hemF或Escherichia col iBL21(DE3)/pACYCDuet-1-hemL-hemA pCDFDuet-1-hemD或Escherichia coli BL21(DE3)/pACYCDuet-1-hemL-hemA pCDFDuet-1-hemF。
10.应用权利要求1-4任一所述大肠杆菌工程菌发酵生产ALA的方法，其特征在于，将工程菌株活化后，转接发酵培养基，30-37℃，200r/min培养，发酵周期28-36h。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江南大学，未经江南大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410274445.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种可食用禽肝脏蛋白的提取方法
- 下一篇：一种植物复合茶的制备方法
