[发明专利]HRM分析技术检测硫嘌呤个体化用药基因多态性的方法

权利要求书

1.一种HRM分析技术检测硫嘌呤类药物个体化用药相关基因多态性的方法，其特征在于包括以下成分：（1）TPMT  rs1142345基因座PCR扩增与测序引物，（2）TPMT  rs1142345座PCR探针2对，（3）PCR扩增试剂，（4）阳性参照，（5）阴性参照。

2.根据权利1所述的检测方法，其特征在于：采用硅胶吸附法抽提被测者口腔上皮细胞/外周血细胞样本的基因组DNA，电泳凝胶成像法对DNA的浓度和纯度作检测，待测样本浓度标化到10ng/ul。

3.根据权利1所述的检测方法，其特征在于：采用在线软件Primer 3设计HRM引物，确定最佳引物为18-25bp大小，PCR产物长度80-150bp；相关引物信息如下：

TPMT  rs1142345引物序列：

rs1142345-F  GGTTGATGCTTTTGAAGAACG

rs1142345-R  CCTCAAAAACATGTCAGTGTGA。

4.根据权利1所述的检测方法，其特征在于：在每一个PCR反应孔中依次加入Type-it HRM PCR Mix 7.5ul，正、反向引物溶液各0.5ul（10umol/L），检测样品2ul，用灭菌重蒸馏水补足15ul；在Rotor-Gene Q上进行反应，PCR反应条件为92-97℃变性5-15分钟，92-97℃变性10-30秒，57-65℃退火10-30秒，70-75℃延伸10-30秒，30-50个循环；HRM反应条件：92-97℃变性1分钟，40℃复性1分钟，初始熔解温度60-65℃开始程序升温熔解至95℃，过程中实时监测荧光信号，30-50次每秒。

5.根据权利1所述的检测方法，其特征在于：应用Rotor-Gene Q软件分析HRM结果，通过标准曲线基于曲线偏移（纯合子）和曲线形状变化（杂合子）展现不同的基因型；定义已知样本基因型后，软件会自动调出所有检测样本的基因型。

6.根据权利要求1所述检测方法的阴性参照，其特征在于：阴性参照的DNA浓度为10 ng/ul。