[发明专利]一种农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法

权利要求书

1.一种农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.获取麻疯树子叶外植体，将子叶外植体在20 mg/L高浓度TDZ溶液中浸泡40分钟后取出；

S2.将子叶外植体置于无激素的预培养基上培养1～4天后，用OD₆₀₀为0.1～0.2的低浓度农杆菌菌液侵染子叶外植体30秒；

S3.将侵染后的子叶外植体置于无抗生素和激素的共培养基上培养1～6天后，再将子叶外植体置于无激素的筛选和恢复培养基上培养，获得抗性芽；

S4.将抗性芽进行伸长培养，对伸长后的小芽或芽条进行PCR检测，以PCR检测结果为阳性的小芽或芽条为接穗进行微嫁接，获得遗传转化苗。

2.根据权利要求1所述的农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，S2所述预培养基的培养时间为1天。

3.根据权利要求1所述的农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，S3所述共培养基的培养时间为2天。

4.根据权利要求1所述的农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，S2所述农杆菌菌液为含有pCambia 1300重组质粒的EHA105农杆菌菌液。

5.根据权利要求1所述的农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，S2所述预培养基为：MS培养基配方的无机成分+MS培养基配方的有机成分+100 mg/L肌醇+30 g/L蔗糖+300 mg/L蛋白胨+7 g/L琼脂，pH为5.8～6.0。

6.根据权利要求1所述的农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，S3所述共培养基为：MS培养基配方的无机成分+MS培养基配方的有机成分+2 g/L肌醇+500 mg/L水解酪蛋白+30 g/L蔗糖+100 mg/L乙酰丁香酮，pH为5.5。

7.根据权利要求1所述的农杆菌介导的麻疯树遗传转化方法，其特征在于，S4所述PCR检测时，取长度大于或等于0.5 cm抗性小芽或芽条，从小芽或芽条的叶片上剪下一小块直径＜2 mm的叶片，放入PCR反应混合液中直接进行检测。