[发明专利]一种热稳定性提高的角蛋白酶突变体及其制备方法

权利要求书

1.一种角蛋白酶突变体，其特征在于，是将嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)BBE11-1中角蛋白酶KerSMD的C端前导肽和/或N端前导肽替换为嗜麦芽窄食单胞菌BBE11-1中角蛋白酶KerSMF的相应的前导肽序列。

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述角蛋白酶KerSMD的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述角蛋白酶KerSMF的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。

5.编码权利要求1-4任一所述突变体的基因。

6.携带权利要求5所述基因的载体、重组细胞或基因工程菌。

7.一种获得权利要求1所述角蛋白酶突变体的方法，其特征在于，将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角蛋白酶KerSMD的C端前导肽结构域的105个氨基酸和/或N端前导肽123个氨基酸替换成氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的角蛋白酶KerSMF中相应的前导肽序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述角蛋白酶KerSMF的C端前导肽结构域是从Pro445至Tyr548的104个氨基酸，N端是从Gly1至Thr104的104个氨基酸。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

(1)从嗜麦芽窄食单胞菌BBE11-1中获得编码角蛋白酶KerSMD、KerSMF的基因，克隆到pET22b(+)中，构建重组质粒pET22b+kerSMD和pET22b+kerSMF；

(2)采用融合PCR的方法，设计含首尾重叠片段的引物，PCR扩增得到编码三种角蛋白酶突变体的基因序列，连接表达载体pET22b(+)获得含有突变体序列的重组载体；

(3)将重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达，发酵上清液即角蛋白酶突变体粗酶液。

10.权利要求1-4任一所述角蛋白酶突变体在洗涤、纺织、饲料消化、医药领域的应用。