[发明专利]针对食品中的沙门氏菌和志贺氏菌的多重PCR检测用引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种对食品中的沙门氏菌和志贺氏菌进行检测的方法，所述方法包括以下步骤：

a)从所述食品中获取模板DNA的前处理步骤；

b)使用多重PCR检测用引物组或包含所述多重PCR检测用引物组的多重PCR检测用试剂盒对所述模板DNA进行多重PCR扩增的步骤；

c)对扩增产物进行检测的步骤，

从而对所述食品中沙门氏菌和志贺氏菌的存在及含量进行分析，

其中，所述引物组包括如下引物对：

沙门氏菌检测用引物对以及志贺氏菌检测用引物对：

所述沙门氏菌检测用引物对为：

invA基因扩增用引物对：

invA-F：TTGACGAGCTTTATCATTGTCTG；

invA-R：ACGTCTTTTTCTCTTGGTGCC，

和/或

hilA基因扩增用引物对：

hilA-F：TGAATTACGCTCACAACACCTG；

hilA-R：TGCTAAGCAACCAGATTACGATG，

所述志贺氏菌检测用引物对为：

ipaH基因扩增用引物对：

ipaH-F：CTCACATGGAACAATCTCCG；

ipaH-R：TCATTCTCTTCACGGCTTCTG，

和/或

ipaB基因扩增用引物对：

ipaB-F：TGAAAGCAGTCATTGAACCC；

ipaB-R：TGAGAGTTGGACATTGAGGC，

并且其中，在步骤b)中，所述多重PCR扩增的反应体系为：以总体积为25μL计，加入浓度为1pg/μL～100ng/μL的模板DNA 1μL；

所述多重PCR扩增的反应条件为：95℃预变性2min；94℃变性15s，55℃退火20s，72℃延伸30s，共进行35个循环；72℃延伸7min。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述多重PCR检测用试剂盒进一步包含具有如下成分的PCR反应基础溶液：Tris-HCl；KCl；MgCl₂；dATP、dTTP、dGTP及dCTP；以及Taq DNA聚合酶。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，在所述多重PCR检测用试剂盒中，各成分以如下浓度包含于25μL的PCR最终反应溶液中：

4.根据权利要求3所述的方法，其中，在所述多重PCR检测用试剂盒中，各成分以如下浓度包含于25μL的PCR最终反应溶液中：

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述多重PCR检测用试剂盒进一步包含阴性对照DNA和阳性对照DNA。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述阴性对照DNA来自大肠杆菌菌株CGMCC1.3373，所述阳性对照DNA来自肠炎沙门氏菌菌株CICC 21482和福氏志贺氏菌菌株CGMCC1.1868。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括在步骤a)之前对所述食品进行沙门氏菌和志贺氏菌富集培养的步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述富集培养的步骤采用营养肉汤培养基对所述食品进行沙门氏菌和志贺氏菌富集培养，培养温度为37±1℃，培养时间为12-15小时。

9.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述前处理步骤为：采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取法或水煮裂解法从所述食品中获取模板DNA。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述细菌基因组DNA提取试剂盒提取法包括如下步骤：采用OMEGA细菌基因组DNA提取试剂盒提取沙门氏菌的基因组DNA，用NanoDrop 2000超微量分光光度计测定浓度，分装后备用。