[发明专利]一株提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株及其构建方法

权利要求书

1.一株提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于，该菌株为YM-27，分类学名为酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)，于2014年5月15日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2014206。

2.如权利要求1所述的提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：PCR克隆酿酒酵母转录激活因子Msn4基因，连接入rDNA介导的多拷贝整合表达载体YPKR，构建rDNA介导、PGK酵母强启动子的高拷贝整合表达质粒YPKR-Msn4，线性化酶切重组表达质粒，将其转化导入到受体酵母菌株Y49的染色体中，获得工程菌株YM-27。

3.如权利要求2所述的提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株的构建方法，其特征在于，所述的整合表达载体YPKR，是以酿酒酵母整合载体YIp5为骨架，在其中引入特定的rDNA片段及G418抗性基因，同时引入酿酒酵母PGK强启动子，构建rDNA介导的多拷贝整合表达载体，以适用对酿酒酵母工业菌株的分子生物学操作，提高外源基因的稳定性和表达量。

4.如权利要求2所述的提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株的构建方法，其特征在于，所述的受体酵母菌株Y49，由保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、保藏编号为CGMCC NO.3476自行筛选的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Y09tj，诱变筛选获得。

5.如权利要求1或2所述的提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株在木薯乙醇浓醪发酵生产中的应用。

6.如权利要求5所述的提高对乙醇耐受性的酿酒酵母基因工程菌株在木薯乙醇浓醪发酵生产中的应用，其特征在于，包括以下步骤：取35g木薯粉，淀粉的终浓度为20～40％(W/W)，加水70mL搅拌，加入0.25％(W/W)的尿素，加入耐高温α-淀粉酶，使用量为向每克淀粉质原料中加入0.15KNU的耐高温α-淀粉酶，在震荡水浴锅85℃液化30min，降温至32℃后，按0.10～0.14亿个细胞/mL发酵液接种酿酒酵母发酵，同时加入糖化酶，使用量为向每克原料中加入0.14AGU的糖化酶，初始pH值调整为4.5，发酵温度为30～37℃，转速为90rpm，发酵时间为40～48h。