[发明专利]一种用于筛选微生物胞外胶原酶的酶谱方法

权利要求书

1.一种用于筛选微生物胞外胶原酶的酶谱方法，包括电泳和凝胶的处理步骤，其特征在于，所述电泳过程中所采用的凝胶为在10％SDS-PAGE凝胶中添加质量体积比浓度为0.1％的Ⅰ型胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的用于筛选微生物胞外胶原酶的酶谱方法，其特征在于，所述凝胶的处理过程为：电泳结束后先将凝胶用洗脱液在室温条件下振荡洗脱2次，随后用漂洗液在室温条件下振荡漂洗2次，最后将凝胶用孵育液在37℃下静置孵育12h；孵育结束后将凝胶先经质量体积比为0.1％的考马斯亮蓝R-250染色液染色1h，再经脱色液室温振荡脱色直至透明条带清晰；

所述洗脱液的组成为：由pH值为7.6、浓度为50mmol/L Tris-HCl缓冲液、聚乙二醇辛基苯基醚和CaCl₂组成，所含聚乙二醇辛基苯基醚的体积百分比为2.5％，CaCl₂的浓度为5mmol/L；

所述漂洗液的组成为：由pH值为7.6、浓度为50mmol/L Tris-HCl缓冲液和CaCl₂组成，CaCl₂的浓度为5mmol/L；

所述孵育液的组成为：pH值为7.6、浓度为50mmol/L Tris-HCl缓冲液、十二烷基聚乙二醇醚、NaCl和CaCl₂，其中，十二烷基聚乙二醇醚的浓度为0.02％，NaCl的浓度为200mmol/L、CaCl₂的浓度为5mmol/L；

所述考马斯亮蓝染色液的组成为：1L考马斯亮蓝染色液中含有1.0g考马斯亮蓝R-250、450mL甲醇和100mL冰醋酸；

所述脱色液的组成为：1L脱色液中含有100mL无水甲醇和100mL冰乙酸。

3.根据权利要求1所述的用于筛选微生物胞外胶原酶的酶谱方法，其特征在于，所述电泳过程中所采用的凝胶由浓缩胶和分离胶组成，所述分离胶的组成为：pH值为8.8、浓度为1.5mol/L的Tris-HCl缓冲液24.7％,质量体积比浓度为30％的丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺凝胶贮液的混合物33.3％，质量体积比浓度为10％的SDS水溶液1％，质量体积比浓度为10％的过硫酸铵的水溶液1％，N,N,N',N'-四甲基乙二胺0.1％，质量体积比浓度为1％的Ⅰ型胶原蛋白水溶液10％，余量为超纯水；所述浓缩胶的组成为：pH值为6.8、浓度为0.5mol/L的Tris-HCl缓冲液25％,质量体积比浓度为30％的丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺凝胶贮液的混合物16％，质量体积比浓度为10％的SDS水溶液1％，质量体积比浓度为10％的过硫酸铵的水溶液0.5％，N,N,N',N'-四甲基乙二胺0.1％，余量为超纯水。