[发明专利]草莓皱缩病毒的快速检测试剂盒及方法有效
| 申请号： | 201410280094.2 | 申请日： | 2014-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN104032036A | 公开（公告）日： | 2014-09-10 |
| 发明（设计）人： | 尚巧霞;冉策;陈柳;陈笑瑜;邢冬梅;胡学军;魏艳敏;刘正坪;韩成贵 | 申请（专利权）人： | 北京农学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 102206 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 草莓 皱缩 病毒 快速 检测 试剂盒 方法 | ||
1.检测草草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus)的专用引物，由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成。
2.一种检测草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus)的试剂盒，包括权利要求1所述的专用引物。
3.权利要求1所述专用引物在制备检测草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus)的试剂盒中的应用。
4.权利要求1所述专用引物或权利要求2所述试剂盒在鉴定草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus)病毒病中的应用。
5.一种检测草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus)或检测草莓皱缩病毒(Strawberry crinkle virus)病毒病感染的方法，包括如下步骤：
(1)提取待测生物样本的基因组RNA；
(2)以步骤(1)的基因组RNA为模板，用权利要求1所述的专用引物进行逆转录环介导恒温扩增；
(3)根据步骤(2)的扩增产物鉴定所述待测生物样本是否含有草莓皱缩病毒或者是否感染草莓皱缩病毒病害。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的反应程序为：65℃30分钟，80℃10分钟。
7.如权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的反应体系中，序列表的序列1所示DNA和序列表的序列4所示DNA的浓度均为0.4μM，序列表的序列2所示DNA和序列表的序列3所示DNA的浓度均为0.2μM。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增的体系包括：0.4μM序列表的序列1所示DNA，0.4μM序列表的序列4所示DNA，0.2μM序列表的序列2所示DNA，0.2μM序列表的序列3所示DNA，2.5μl10×Bst buffer，4mMMgSO4，0.4mM dNTPs，0.25M Betaine，3mM DTT，5U逆转录酶，25U RNase Inhibitor，8U Bst DNA polymerase，DEPC ddH2O，扩增体系总体积为25μl。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述逆转录环介导恒温扩增产物的检测方法为下述1)或2)所述的方法：
1)扩增产物中加入0.1μl荧光染料Green DNA Dye，肉眼直接观察，染有草莓皱缩病毒的样本会有沉淀物形成并呈现黄绿色，无草莓皱缩病毒侵染的样本透明并呈橘红色；
2)凝胶电泳和紫外成像方法检测RT-LAMP扩增产物，感染有草莓皱缩病毒的样本能形成瀑布型条带。
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