[发明专利]离心沉降辅助植物转基因的方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物技术，具体是一种离心沉降辅助植物转基因的方法。

背景技术

转基因技术作为生物技术的核心在植物改良、医药、畜牧业和食品工业方面都具有巨大的发展潜力。然而以农杆菌转化为主的植物转基因技术目前存在转化效率低下的问题，大部分植物的转化率为1％左右，这个问题也成为了限制转基因植物产业化生产的主要因素。研究表明，农杆菌浸泡受体植物材料时，只有表层的少数受创伤细胞有可能被转化，而受体材料中的大部分内部细胞没有机会接触到农杆菌。针对这一问题，有人提出超声波辅助农杆菌转化的转思路，这种处理可以增加受体材料表面的创伤程度，对于受体内部细胞来说效果甚微。

发明内容

本发明的目的，就是为了解决上述问题，提供一种离心沉降辅助植物转基因的方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种离心沉降辅助植物转基因的方法，包括如下步骤：

步骤一，通过植物组织培养技术，得到无菌的植物材料；

步骤二，从获得的无菌植物材料中切取受体部位，作为转化受体材料；

步骤三，将包含有目的基因的农杆菌活化到转化状态后，在5000-10000rpm条件下离心并重悬，得到农杆菌重悬液；

步骤四，把植物受体材料浸泡到农杆菌重悬液中，再次进行离心处理；

步骤五，将步骤四中离心处理后的材料转移到无菌玻璃器皿中静置15-20分钟；

步骤六，静置时间结束后，把感染后的植物材料从玻璃器皿中取出来，用无菌滤纸吸干残留的菌液，然后转移到共培养基中共培养；

步骤七，共培养结束后，将感染过的植物受体材料在选择压力下进行筛选，最终获得阳性转化子。

步骤三中所述的转化状态，是指农杆菌液的OD值达到0.5-0.7。

步骤三中所述的重悬，是指将农杆菌在感染之前进行离心沉降后弃上清，然后用植物液体培养基把细菌重新悬浮起来。

步骤四中所述的离心处理是，在25℃下，5000-8000rpm离心5-10min。

本发明将植物受体材料与农杆菌混合后在合理的转速下进行离心沉降处理，离心沉降不仅可以增加受体材料的创伤面积，而且使农杆菌在离心力作用下深入到受体材料内部，显著提高了植物转基因效率。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

下面实施例的烟草来自本申请人的实验室。

本实施例包括如下步骤：

步骤一，从无菌烟草组培苗中取糼嫩叶片，切去叶缘作为受体材料；

步骤二，将包含有GUS基因的农杆菌TG1活化到OD值＝0.6，在50000rpm条件下离心5分钟，然后用MS液体培养基因重悬；

步骤三，把步骤一中的烟草受体叶片浸泡到农杆菌重悬液中，并在5000rpm条件下离心10min；

步骤四，把离心后的材料转移到无菌三角瓶中静置20分钟；

步骤五，静置时间结束后，把感染后的植物材料从三角瓶中取出来，用无菌滤纸吸干残留的菌液，然后转移到共培养基中，黑暗条件下两天；

步骤七，共培养结束后，将感染过的植物受体材料在添加头孢霉素和卡那霉素的MS培养基中筛选；最终通过GUS染色获得22株阳性转化子。

本实施例发现，离心沉降辅助转基因技术，可以使烟草转基因效率提高一倍。