[发明专利]一种用于制备肝细胞靶向转递小干扰RNA的方法有效
| 申请号： | 201410283413.5 | 申请日： | 2014-06-23 |
| 公开（公告）号： | CN104087574B | 公开（公告）日： | 2019-08-02 |
| 发明（设计）人： | 武文斌;巴剑波;陈双红;郝蕙玲;孙锦程;徐雄利;吕鸿雁 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军海军医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/113 |
| 代理公司： | 上海容慧专利代理事务所(普通合伙) 31287 | 代理人： | 王裕 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 制备 肝细胞 靶向 转递 干扰 rna 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种用于制备肝细胞靶向转递小干扰RNA的方法，反应底物包括乳糖酸或半乳糖衍生物、末端氨基修饰RNAi多核苷酸和EDC，其中，乳糖酸或半乳糖衍生物作为耦合反应的羧基供体和靶向耦合物的半乳糖基供体，末端氨基标记RNAi多核苷酸作为耦合反应的伯氨基供体，EDC作为零长度交联剂，其特征在于所述方法在0.05M～0.1M MES缓冲液pH 4.5中进行，乳糖酸与末端氨基标记RNAi多核苷酸摩尔比例为1∶1～2000∶1，EDC与乳糖酸摩尔比例为1∶1～100∶1，所述RNAi多核苷酸为siRNA。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法为25mM乳糖酸、12.5μM末端氨基标记RNAi多核苷酸与0.1M EDC三者混合于0.1M MES pH 4.5缓冲液中，短暂振荡后离心，于25℃反应2h或4℃过夜，使羧基与伯氨基发生缩合反应，形成半乳糖化RNAi多核苷酸共价耦合物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述RNAi多核苷酸可被化学修饰，该化学修饰包括:硫代磷酸酯核苷酸间连接、2'-O-甲基核糖核苷酸、2'-脱氧-2'-氟核糖核苷酸、2'-脱氧核糖核苷酸、5-C-甲基核苷酸、或倒置脱氧脱碱基残基掺入。
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