[发明专利]一种甲钴胺片有关物质的测定方法

权利要求书

1.一种甲钴胺片有关物质的测定方法，包括如下步骤：

(1)供试品的制备：直接研磨甲钴胺片至细粉，取适量细粉置于量瓶中，加流动相使细粉溶解、稀释至刻度，制成浓度为0.25mg/ml的溶液；摇匀、滤过，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品的制备：取适量步骤(1)所得的供试品溶液，加流动相稀释至刻度，制成浓度为7.5μg/ml的溶液，作为对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱测定有关物质的含量：取步骤(2)所得的对照品溶液注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，再精密量取供试品溶液和对照品溶液分别注入液相色谱仪，记录色谱图至甲钴胺峰保留时间的2倍，供试品溶液中单个杂质含量不得大于1.0％，总杂质含量不得大于2.0％。

色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为300～360nm，进样量为20μl，柱温为30℃，流速为0.5～1.5ml/min；梯度洗脱；

(4)计算供试品中各杂质的含量。

2.根据权利要求1所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的梯度洗脱中，于0～2分钟，流动相中乙腈的体积占5％，磷酸盐缓冲液的体积占95％；于2～15分钟，流动相中乙腈的体积从5％变化为15％，磷酸盐缓冲液的体积从95％变化为85％；于15～30分钟，流动相中乙腈的体积从15％变化为20％，磷酸盐缓冲液的体积从85％变化为80％；于30～32分钟，流动相中乙腈的体积从20％变化为25％，磷酸盐缓冲液的体积从80％变化为75％；于32～35分钟，流动相中乙腈和磷酸盐缓冲液的体积各自回到初始比例，色谱柱重新平衡；后运行2分钟，使色谱柱充分平衡。

3.根据权利要求1或2所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.01～0.05mol/L，PH值为3.5～5.0。

4.根据权利要求3所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液的浓度为0.03mol/L，PH值为3.5。

5.根据权利要求1或2所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢胺、磷酸氢二胺中的一种或几种。

6.根据权利要求5所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲液选自磷酸二氢钠。

7.根据权利要求1所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的步骤(1)、步骤(2)中的流动相是由乙腈与0.03mol/L磷酸二氢钠溶液按照体积比19：81的比例混合而成。

8.根据权利要求1所述的甲钴胺片有关物质的测定方法，其特征在于：所述的色谱条件为：固定相是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，流动相是由乙腈与磷酸盐缓冲液组成的混合液；检测波长为342nm，进样量为20μl，柱温为30℃，流速为1.0ml/min；梯度洗脱。