[发明专利]DL-告依春中表告依春与告依春的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种将混合物DL-告依春进行拆分的方法，即，将表告依春与告依春自混合物中分离出，得到光学纯单体的方法。

背景技术

DL-告依春(也叫做(R,S)-告依春)为表告依春(R-告依春)和告依春(S-告依春)的混合物，二者互为异构体，该混合物曾被认为是板蓝根的主要有效成分。但后续研究表明，表告依春与告依春的活性具有很大差异，其中的表告依春才是抗流感病毒的活性成分，告依春不但无该活性，更有文献报道其具有一定的毒性。因此，将将DL-告依春进行手性拆分，得到光学纯的表告依春单体，对于研制高效、低毒副作用的抗病毒药物具有十分重要的意义。为此，发明人曾经开发了一种正向手性色谱拆分方法(发明专利申请201010222106.8)，成功将二者分离，但该方法存在纯度偏低、操作繁琐、耗时长、不适于放量制备等不足。

超临界流体色谱(supercritical fluid chromatography，SFC)是一种以超临界流体做流动相，依靠流动相的溶剂化能力来进行分离、分析的技术。与常规的HPLC、GC技术相比，SFC具有体系粘度低、扩散和传质速率高等特点，可以有效地弥补HPLC和GC在分离手性物质方面的不足。但由于中药活性成分十分复杂、极性偏大等原因，SFC在中药活性成分手性分离方面的研究鲜见报道。

发明内容

针对现有DL-告依春手性分离方法存在的不足，发明人经过大量的系统实验研究，建立了一种方便高效、重复性好、分离单体纯度更高的手性分离方法。

本发明提供了一种DL-告依春中表告依春与告依春的分离方法，该分离方法为：将DL-告依春制成溶液，以超临界流体色谱法进行分离。

所述的将DL-告依春制成溶液，具体为，将DL-告依春加有机溶剂或有机溶剂与水的混合溶液溶解，分析时，制成浓度为0.1～10mg/ml(该浓度为混合物的浓度)的溶液，优选制成1mg/ml的溶液，进样量优选为10μL；制备时，制成浓度为10～100mg/ml(该浓度为混合物的浓度)的溶液，进样量优选为50μL；所述的有机溶剂为常用有机溶剂，优选甲醇。该DL-告依春为表告依春与告依春的混合物，该混合物的提取已经有多种方法的报道，本发明所使用的DL-告依春对其提取方法没有要求，也可直接购买得到。

所述的超临界流体色谱法，其固定相是以纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性色谱柱，该色谱柱为键合型或涂敷型，优选用键合型色谱柱。超临界流体色谱法固定相的填料相种类很多，有几十种，如直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)、纤维素-三(4-氯苯基氨基甲酸酯)等。即便是同一种类型的色谱柱不同厂家的填装工艺也不尽相同，填料与填装工艺对固定相的分离效果影响非常大，因此，固定相的选择对于手性分离方法的建立至关重要。发明人通过对DL-告依春结构、性质的分析，结合实验验证，惊喜地发现，以纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)为填料的手性色谱柱可以将表告依春及告依春完全分离，两单体的纯度均在99％以上，分离度均不低于2.5，远高于《中国药典》对分离度的要求。

当所述的固定相为键合型手性色谱柱时，所述分离方法的流动相为体积比83:17到90:10的二氧化碳-乙腈，流速为3～4ml/min，柱温为33～38℃，背压为100～150bar。各参数在该范围内的所述分离方法可以使表告依春与告依春的分离度达到3以上，5分钟以内完成分离。该分离方法十分快捷，且单体纯度非常高，与现有分离方法相比，分离效率、效果均得到显著地提高。

当所述的固定相为键合型手性色谱柱时，本发明的分离方法优选为：流动相为体积比85:15的二氧化碳-乙腈，流速为3.5ml/min，柱温为35℃，背压为100bar。该优选方法可使两成分在4分钟内完成分离，又不被溶剂峰所影响，且两峰的分离度高达3.5。

上述的固定相(键合型手性色谱柱)是指CHIRALPAK IC(5um*4.6mm*150mm)，该手性色谱柱主要用于分析，也可称为分析柱。此外，为了了解该分离方法的耐用性及放量制备的情况，发明人还考察了分析柱的其他规格及半制备柱、制备柱，如CHIRALPAK IC(5um*4.6mm*250mm)、CHIRALPAK IC(5um*20mm*250mm)、CHIRALPAK IC(5um*50mm*150mm)等，均可很好地将表告依春与告依春进行分离。