[发明专利]一种去除胰蛋白酶中的内毒素的方法在审
| 申请号： | 201410294257.2 | 申请日： | 2014-06-26 |
| 公开（公告）号： | CN104017792A | 公开（公告）日： | 2014-09-03 |
| 发明（设计）人： | 黄臻辉;周建华;周伟洁;琚姝;王克平;汪雅雯;孙源远 | 申请（专利权）人： | 上海第一生化药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/76 | 分类号： | C12N9/76 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 朱水平;王卫彬 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 去除 胰蛋白酶 中的 内毒素 方法 | ||
1.一种去除胰蛋白酶中的内毒素的方法，其包括下述步骤：将胰蛋白酶滤饼溶解于水中，超滤浓缩得到浓缩液，依次加入磷酸盐水溶液和钙盐水溶液，调节pH值为8～9，离心，即可。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的胰蛋白酶滤饼通过下述步骤得到：将胰蛋白酶原料用水溶解，加入硫酸调节pH值为2～3，加入饱和硫酸铵溶液盐析，加入硼酸缓冲液调节pH值为7.5～7.7，再加入胰蛋白酶进行活化，用硫酸调节pH值为2.5～3.5，加入固体硫酸铵进行盐析，即得到胰蛋白酶滤饼。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的水与所述的胰蛋白酶滤饼的体积质量比为8～12ml/g；
和/或，所述的超滤浓缩采用的超滤膜为德国赛多利斯公司的Hydrosart超滤膜，截留相对分子质量是5kDa或10kDa；
和/或，所述的超滤浓缩得到的浓缩液的体积为超滤浓缩前体积的0.1～0.3倍。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐为磷酸钠和/或磷酸钾；
和/或，所述的钙盐为醋酸钙和/或氯化钙。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐水溶液与所述的浓缩液的体积比为(0.1～0.2)：1；
和/或，所述的钙盐水溶液与所述的磷酸盐水溶液的体积比为(0.5～0.7)：1。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐水溶液的浓度为0.2～0.5mol/L；
和/或，所述的钙盐水溶液的浓度为0.8～1.5mol/L。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐与所述的钙盐的摩尔比为1：(0.5～2)。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐与所述的钙盐的摩尔比为1：1.5。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离心的转速为3000～4000rpm。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的离心为冷冻离心10～30min；所述的冷冻离心的温度较佳地为4～10℃。
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