[发明专利]胃泌素释放肽前体定量测定试剂盒、其制备方法及检测方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种胃泌素释放肽前体（ProGRP）定量测定试剂盒、其制备方法及检测方法，所述定量测定试剂盒广泛用于包括小细胞肺癌在内的多种肺癌的早期发现和治疗监测、复发监测等。

背景技术

    由于人口老龄化、城市工业化、吸烟、空气与环境污染、遗传易感等因素的影响，我国肺癌的发病率和死亡率迅速上升。根据《2012年肿瘤登记年报》统计数据显示：肺癌已代替肝癌成为我国首位恶性肿瘤死亡原因。目前，我国每4例恶性肿瘤死亡者中就有1例是肺癌。

肺癌主要分为小细胞肺癌（SCLC）和非小细胞肺癌（NSCLC）。 NSCLC约占肺癌的80%，包括大细胞癌、腺癌和鳞癌。相比NSCLC，由于SCLC仅占肺癌的15－20%，因此不管是诊断还是治疗领域，SCLC获得的关注度都较低。但SCLS却是一种恶性化程度更高、病因更复杂的肿瘤，具有快速和侵袭性生长的特点，易发生广泛性坏死和淋巴结转移。

胃泌素释放肽前体（ProGRP）作为小细胞肺癌（SCLC）新的标记物，具有敏感性高、特异性强的特点，并可准确反映小细胞肺癌（SCLC）病情及对化疗的反应。因此，将对小细胞肺癌（SCLC）的诊断具有较高敏感度，特异度和准确率的胃泌素释放肽前体（ProGRP）作为提示小细胞肺癌（SCLC）的血清肿瘤标志物，可为临床鉴定小细胞肺癌（SCLC）提供参考依据。胃泌素释放肽前体作为血清肿瘤标志物，不仅可用于小细胞肺癌（SCLC）的早期诊断，还有助于判断治疗效果及早期发现肿瘤复发。另外，胃泌素释放肽前体还能区分小细胞肺癌（SCLC）和非小细胞肺癌（NSCLC）。目前，国内外采用酶联免疫方法测定胃泌素释放肽前体（ProGRP）已处于临床应用阶段，但是酶联免疫法灵敏度不高，不易检测出痕量胃泌素释放肽前体（ProGRP），影响对小细胞肺癌（SCLC）检测的准确性。

ELISA技术由于其分析灵敏度不高，因而限制了其发展与使用。本发明结合了免疫反应的高特异性和化学发光反应的高灵敏性，仪器简单，成本低廉，检测范围更广，发展潜力更大，因而受到了越来越多的关注。

经专利检索表明，北京科美东雅生物技术有限公司在2008年有申请专利号为CN 101368966的专利——一种胃泌素释放肽前体化学发光免疫分析测定试剂盒。但这项专利并没有涉及磁颗粒，不会影响到我们公司对本发明的专利申报。本发明利用磁颗粒，能够使该发明的灵敏度提高、特异性增强，增加了诊断的准确性。

发明内容

    本发明目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、操作简单的胃泌素释放肽前体（ProGRP）板式磁颗粒化学发光免疫分析测定试剂盒、其制备方法及其检测方法。

本发明的目的是这样实现的： 

    一种胃泌素释放肽前体定量测定试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有微孔板和位于盒体底部的支撑板，其中微孔板由48或96个微孔组成，支撑板上开有多个孔，所述孔内共放置有八个试剂瓶，所述八个试剂瓶内分别含有磁分离试剂、酶反应物、稳定增强剂、校准品、质控品、清洗浓缩液、稀释液以及底物溶液，其中磁分离试剂含有胃泌素释放肽前体（ProGRP）单克隆抗体包被的磁颗粒。

    一种胃泌素释放肽前体定量测定试剂盒的制备方法，其试剂准备过程如下：

步骤一、磁分离试剂的制备

一、磁珠缓冲液配制

    （1）、称取缓血酸胺TRIS 4.58g和NaCl 6.81g于1L容器中，然后称取0.96g Tween-20（吐温20）于20mL容器中加适量水使其完全溶解后，再倒入上述1L容器中；

    （2）、用移液器将防腐剂Proclin-300量取0.2mL于10mL纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入 800mL纯化水，充分搅拌；

（3）、调节pH计测量其pH值，控制pH在7.95-8.05之间；

（4）、称取BSA（牛血清白蛋白） 3g倒入上述1L容器中；

    （5）、最后1L容器定容至1000mL，用0.2μm滤器过滤；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存； 

二、磁分离试剂的制备

    （1）、将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50μL DMSO中，取2mg抗ProGRP单克隆抗体溶于pH 9.5的0.1mol/L的PB缓冲液（磷酸盐缓冲液）中至总体积为1mL；