[发明专利]一种神农香菊的离体培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及神农香菊的繁殖技术，更具体地涉及一种神农香菊的离体培养方法。

背景技术

神农香菊(Dendranthema indicum(L.)Des Moul.var.aromaticum Q.H.Liu et S.F.Zhang Var.Nov.)是武汉植物研究所刘启宏先生1982年在神农架首先发现并命名的一种新资源植物，多年生草本，叶片较小而厚，深绿色，上面叶脉明显隆起，下面具凹陷极小腺体，头状花序较小，通常直径不超过1.5厘米，与野菊的主要区别在于花、叶及根均具有特殊的浓郁香气。神农香菊集中分布在神农架海拔2600-2700米的向阳开阔的山坡、路旁，是神农架特有的菊科(Asteraceae)菊属(Dendranthema)的一个新变种，形似野菊(Dendranthema indicum(L.)Des Moul.)。鄂西山区民间以神农香菊阴干的花、叶用于治疗感冒、咽喉肿痛、目赤肿痛、痈脚疮疖等。化学成分分析表明神农香菊的挥发油成分主要以萜类中的单萜和倍半萜及其含氧衍生物为主。神农香菊挥发油中的萜类化合物有蒎烯、萜品醇、侧柏烯、樟烯、龙脑、1，8-桉叶油素、乙酸龙脑酯等化合物，药理试验分析表明这些成分具有抗菌、抗病毒、镇痉、祛痰、止咳平喘等作用；挥发油不仅在医药上具有重要的作用，还可用于饮料、香烟及化妆品等香料及日用化学工业上，其开发利用率高，经济价值将十分明显。

神农香菊的分布范围窄，且资源十分有限。为此，很多研究人员都积极的进行神农香菊的人工繁殖与栽培。技术人员分别对神农香菊进行了引种栽培试验，通过植物组织培养技术可快速获得大量的再生个体，器官直接发生途径获得再生植株可有效地缩短培养周期和减少变异环节，对扩大该物种的繁殖系数不失为一种有效方法。其中有以神农香菊的幼叶为外植体及微扦插方式，建立神农香菊试管内繁殖体系。以神农香菊花蕾为外植体，成功诱导神农香菊花蕾愈伤组织并获得再生植株，但受材料来源限制。也有通过神农香菊离体萌发腋芽诱导不定芽建立神农香菊离体再生体系，但其组培苗细弱和徒长的问题一直没有得到有效解决，其壮苗的优化体系也存在问题。基于上述问题，迫切需要通过外植体、植物生长调节剂、基本培养基和培养条件的筛选，建立繁育周期短、遗传稳定高频率发生的神农香菊再生体系，从而为神农香菊的生物技术育种、种质资源保存、快速繁殖、人为控制条件下的生长发育研究提供良好的实验体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种神农香菊的离体培养方法，可高频率地诱导出大量的神农香菊丛生芽，经过壮苗生根后再生植株成活率高，可达100％。

本发明所述神农香菊的离体培养方法，以经灭菌的带芽点幼嫩茎段为外植体，经过丛生芽的诱导、壮苗培养、生根、炼苗和移栽后获得神农香菊再生植株，其中：

所述带芽点幼嫩茎段在灭菌前进行清洗，所述清洗步骤为：使用浓度为0.2-0.8％的洗洁精溶液浸泡20-40min，之后刷洗，再用水冲洗1-2h；因为神农香菊的幼嫩茎段挥发油含量较高，在幼嫩茎段上尤其是芽点位置容易粘结过多的灰尘，且不容易清洗。所以，在清洗的时候加入微量的洗洁精可以有效去除幼嫩茎段上粘结的灰尘，确保带芽点幼嫩茎段更加洁净，为丛生芽诱导成提供基础。

所述壮苗培养和生根培养时均在其培养基中加入了野古草提取液和活性炭；

所述壮苗培养步骤中使用的壮苗培养基为，在MS基本培养基的基础上添加了活性炭、野古草提取液、6-苄基腺嘌呤(6-BA)和α-萘乙酸(NAA)；

优选地，所述壮苗培养基中6-苄基腺嘌呤的浓度为0-2.0mg/L，α-萘乙酸的浓度为0-2.0mg/L，活性炭的浓度为0.2-0.8％，野古草上清液的浓度为5-10％；

所述野古草上清液的制备方法为取1g野古草干燥粉末加入5ml蒸馏水，4℃下静置20h后，将所述0.2g/ml的提取物冷冻离心提取，得野古草上清液。

优选地，所述壮苗培养包括以下步骤：将所述壮苗培养基装入锥形瓶中，将所述丛生芽诱导培养获得的丛生芽接种到所述壮苗培养基上，在温度25±2℃，光照时间12-16h/天，光照强度2000-2500lux的条件下进行培养20-60天。