[发明专利]母乳脂肪酸谱数据库的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及脂肪酸含量测定领域，尤其涉及一种母乳脂肪酸谱数据库的建立方法。

背景技术

母乳是婴儿成长唯一最自然、最安全、最完整的天然食物，其营养丰富，含有婴儿成长所需的碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质和抗体等物质，易于吸收和利用，能够保证婴儿的健康成长。特别是，母乳中含有的百分之五十的脂肪，除了能够提供婴儿身体日常消耗的热量外，还能满足婴儿脑部发育所需的脂肪。母乳可提供婴儿自身体内不能合成的必需脂肪酸(essential fatty acid，EFA)，如亚油酸(linoleic acid，LA)和α-亚麻酸(linoleic acid，LNA)以及一些长链多不饱和脂肪酸(long chain polyunsaturated fatty acid，LC PUFA)，如花生四烯酸(arochidonic acid，AA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)，它们对于婴儿的生长发育有着重要的意义，尤其是后者对婴儿中枢神经系统发育的作用越来越引起人们的重视。

然而，母乳中的微量和常量营养素是会随着哺乳的进行以及乳母饮食改变而发生变动的，母乳中的某些脂肪酸如二十二碳六烯酸(DHA)等会随乳母饮食的变化而变化。母亲饮食中补充鱼油或DHA能够使母乳中的DHA含量显著升高，母乳中的其它脂肪酸成分也都受到了不同程度的膳食影响。

我国目前所有的婴儿配方奶粉都是模仿西方大品牌的产品配制的。不同民族不同饮食方式的人群对食物的应答不同，不同国家哺乳妇女由于遗传背景和饮食状况的不同，母乳中部分成分也不相同，如脂肪酸成分与含量就有着显著的不同，即使在同一个国家，不同地区由于环境和饮食习惯的不同，母乳脂肪酸成分及含量同样存在较大的差异。对婴儿而言，如果母亲由于种种原因不能用母乳喂养婴儿，那么一种与母乳成分相同的配方奶粉是最安全、最健康、最理想的选择。

在中国人群中，尚没有建立母乳脂肪酸谱数据库的快速、准确测定的方法，建立此方法对于构建不同地区人群的母乳脂肪酸谱数据库，了解中国不同地区人群母乳的特点和哺乳期母乳脂肪酸的变化特征，指导我国企业以母乳脂肪酸谱数据库为基础，生产出真正的适合中国婴儿的配方奶粉具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种能够实现母乳脂肪酸含量快速、准确测定，建立母乳脂肪酸谱数据库的方法。

为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是：

一种母乳脂肪酸谱数据库的建立方法，包括以下步骤：

(1)取多个母乳样品；

(2)将每个母乳样品与甲醇进行酯化反应，反应完成后，将反应液离心，取上层有机相；

(3)将所述有机相注入SPE同相萃取小柱，用洗脱液淋洗SPE固相萃取小柱，收集流出液，N₂吹干，获得纯化的脂肪酸甲酯；

(4)利用气相色谱采集脂肪酸甲酯图谱，采用归一法计算得到母乳样品中各类脂肪酸的含量；

(5)建立母乳脂肪酸谱数据库。

所述酯化反应包括：将母乳样品、甲醇/苯溶液混合均匀，加入乙酰氯，水浴加热反应，反应完成后加入可溶性碳酸盐，中和混合液。

所述母乳样品、甲醇、苯和乙酰氯的体积比为：1∶16∶4∶2。

所述水浴加热反应的温度为80～100℃，时间为1～2小时。

所述SPE固相萃取小柱为聚酰胺柱，柱容量为500mg。

所述洗脱液为乙醚-正己烷。

所述气相色谱采用安捷伦DB-23色谱柱。

所述气相色谱采集脂肪酸甲酯图谱的分析条件为：进样口温度：270℃，进样体积：2μL，检测器温度：270℃，载气：N₂，流速：2.30mL/min，气体配比：氮气∶氢气∶空气为20∶7∶5，柱温：140℃，柱温升温程序：140℃，保持2min，以10℃/min升至160℃，保持2min；以10℃/min升至220℃，保持4min；以10℃/min升至240℃，保持6min。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)传统方法需对样品进行24小时浸提，并且需通过过滤与旋转蒸发获得脂肪酸才能进行甲酯化，而本发明方法只需采用甲酯化的一步法即可完成测定，无需浸提。本发明提供的母乳脂肪酸测定方法与传统甲醇/氯仿测定法相比，能够缩短测定时间，减少试剂消耗。此外，本发明方法无需使用氯仿，可以避免其对人体造成的损害。