[发明专利]CYP119‑T213G酶及其纯化方法

权利要求书

1.一种CYP119-T213G酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.如权利要求1所述的CYP119-T213G酶，其特征在于：编码CYP119-T213G酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.表达CYP119-T213G酶的载体。

4.如权利要求3所述的载体，其特征在于：所述的载体为质粒。

5.包含权利要求3或4所述载体的宿主。

6.如权利要求5所述的宿主，其特征在于：所述的宿主为大肠杆菌。

7.CYP119-T213G酶的纯化方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、取发酵后的菌液离心收集菌体，PBS悬浮菌体，破碎细胞，离心，收集上清液，获得粗酶液；

b、0.22μm过滤膜过滤粗酶液，利用Ni-NTA柱进行纯化，收集洗脱液；

c、对洗脱液用超滤膜浓缩，再用50mM pH7.4的PBS置换洗脱液3次，浓缩至酶液呈现鲜红色或红黑色，得到纯品。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤b中的洗脱条件为：平衡液I洗脱5个柱体积；将0.22μm过滤膜过滤后的粗酶液上柱；平衡液I洗5个柱体积；平衡液II洗5个柱体积；洗脱液I洗6个柱体积；洗脱液II洗5个柱体积，收集洗脱液；平衡液I为50mM PBS，pH7.4，5mM咪唑；平衡液II为50mM PBS，0.5M NaCl，pH7.4，5mM咪唑；洗脱液I为50mM PBS，pH7.4，20mM咪唑；洗脱液II为50mM PBS，pH7.4，80mM咪唑。