[发明专利]用于鉴定金钱豹的多重PCR引物和方法以及它们在鉴定金钱豹中的应用

权利要求书

1.一种用于鉴定金钱豹(Panthera pardus)的多重PCR引物，其特征在于，所述多重PCR引物包括如SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示的引物对1，以及如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示的引物对2。

2.一种利用多重PCR鉴定金钱豹(Panthera pardus)的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)提取待测样品的总DNA；

(2)采用多重PCR引物对步骤(1)中提取的总DNA进行PCR扩增；

(3)取步骤(2)中得到的产物做琼脂糖凝胶电泳检测；

其中，所述多重PCR引物为权利要求1中所述的多重PCR引物，

其中，在步骤(3)所得的琼脂糖凝胶电泳图中，若含有步骤(2)得到的产物的泳道中出现2条条带，则判断所述待测样品为来自金钱豹的样品，若含有步骤(2)得到的产物的泳道中不出现2条条带，则判断所述待测样品不是来自金钱豹的样品。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，出现的2条条带中所含有的DNA片段的长度分别为230bp和375bp。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，以30μL的PCR扩增体系为基准，每条引物的浓度分别为0.25-0.5pmol/L，DNA模板的用量为45-55ng。

5.根据权利要求2或4中所述的方法，其中，所述PCR扩增过程的退火温度为55-60℃，退火时间为25-40s。

6.根据权利要求1所述的多重PCR引物或权利要求2-5中任意一项所述的方法在鉴定金钱豹(Panthera pardus)中的应用。