[发明专利]一种IgA1酶及其制备方法和应用在审
申请号: | 201410299797.X | 申请日: | 2014-06-27 |
公开(公告)号: | CN104073474A | 公开(公告)日: | 2014-10-01 |
发明(设计)人: | 樊均明;王丽;文集;李雪英 | 申请(专利权)人: | 樊均明 |
主分类号: | C12N9/00 | 分类号: | C12N9/00;A61K38/43;A61P13/12;C12R1/46;C12R1/21;C12R1/36 |
代理公司: | 成都高远知识产权代理事务所(普通合伙) 51222 | 代理人: | 李高峡 |
地址: | 610000 四川省成都*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 iga1 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种制备IgA1酶的方法,包括以下步骤:
1)以细菌作为发酵菌株,发酵完成后,得到发酵液;所述的细菌为淋球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌或变异链球菌;
2)分离纯化发酵液,得IgA1酶。
2.根据权利要求1所述的制备IgA1酶的方法,其特征是:所述的细菌为淋球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、脑膜炎球菌。
3.根据权利要求1~2任一一项所述的制备IgA1酶的方法,其特征是:所述淋球菌为菌株号为ATCC49226的菌株;所述流感嗜血杆菌为菌株号为ATCC49247或ATCC10211的菌株;所述肺炎链球菌为菌株号为6303TM(血清3型)的菌株;脑膜炎球菌为菌株号为ATCC13090的菌株。
4.根据权利要求3所述的制备IgA1酶的方法,其特征是:所述的细菌为淋球菌,其菌株号为ATCC49226;或者为流感嗜血杆菌,其菌株号为ATCC49247。
5.根据权利要求4所述的制备IgA1酶的方法,其特征是:所述的细菌为流感嗜血杆菌,其菌株号为ATCC49247。
6.根据权利要求1所述的制备IgA1酶的方法,其特征是:
步骤1)中所述的发酵方法是:
将细菌复苏后接种于液体培养基中,置37℃200r/min震荡培养18h,使菌悬液的光吸收值A600为1.0;
将菌悬液以体积比10%的比例接种于液体培养基中,37℃200r/min震荡培养15-24h后,离心,收集上清液备用;
步骤2)中所述的分离纯化方法是:
取步骤1)得到的上清液,在4℃搅拌条件下加入饱和硫酸铵(NH4)2SO4至终浓度为50%,之后静置2h,于4℃离心,收集沉淀,用Tris-HCl缓冲液溶解,即获得IgA蛋白酶粗制品,透析、浓缩后即得。
7.一种IgA1酶,其特征是:其最适作用温度为35-45℃;最适作用PH值为6-10。
8.根据权利要求7所述的IgA1酶,其特征是:其底物为低糖基化的IgA1。
9.根据权利要求7所述的IgA1酶,其特征是:它是由权利要求1~6任意一项所述的方法制备的。
10.权利要求7所述的IgA1酶在制备治疗IgAN的药物中的用途。
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