[发明专利]一种用于评价三七抗凝活性的生物效价检定方法

权利要求书

1.一种用于评价三七抗凝活性的生物效价检定方法，所述生物效价检定方法包括以下步骤：

a.配制供试品溶液和供试品稀释液

制备三七药材的干浸膏；

在测定前，用生理盐水将所述干浸膏配置成供试品溶液，过滤除菌，贮存，优选地在4℃下进行贮存，备用；

测定时，估计供试品抗凝效价，用所述生理盐水稀释所述供试品溶液，得到不同浓度的供试品稀释液；

b.配制对照品溶液和对照品稀释液

用所述生理盐水将阿司匹林配制成对照品溶液，过滤除菌，贮存，优选地在4℃下进行贮存，备用；

测定时，用所述生理盐水稀释所述对照品溶液，得到不同浓度的对照品稀释液；

c.测试

取凝血仪测试杯，向每个通道加入血浆并加入供试品稀释液或对照品稀释液，充分混匀，预温后，用全自动凝血仪进行检测；

d.生物效价计算

以所述全自动血凝仪所检测的凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间、凝血酶时间及纤维蛋白原为评价指标且对给药浓度取对数，优选地，以活化部分凝血活酶时间为评价指标，按照2010年版《中国药典》生物检定统计法项下的量反应平行线法(2·2)计算三七药材样品的抗凝效价及实验误差，可信限率FL％不得超过40％，优选地不超过30％。

2.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，所述干浸膏通过以下制备：

将三七药材样品粉碎成粗粉，置于圆底烧瓶中，加提取溶剂浸泡，回流提取，抽滤，减压回收溶剂，真空干燥，得干浸膏并计算收率；

优选地，所加入的提取溶剂的以毫升计的体积为三七药材样品粗粉的以克计的重量的5-15倍；浸泡时间为30分钟；回流提取两次，每次1.5小时。

3.根据权利要求2所述的生物效价检定方法，其中，所述提取溶剂是体积百分数为75％的乙醇、体积百分数为75％的甲醇或水，优选地，所述提取溶剂为水，更优选地，所述提取溶剂为去离子水。

4.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，在步骤a和步骤b中，用0.22μm微孔滤膜过滤除菌。

5.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，所述供试品溶液的浓度为10mg·ml^-1，所述对照品溶液的浓度为5mg·mL^-1。

6.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，用于测试的血浆为大鼠血浆、家兔新鲜血浆、兔血冻干血浆或健康人冻干血浆，优选地，所述血浆为家兔新鲜血浆。

7.根据权利要求6所述的生物效价检定方法，其中，所述家兔新鲜血浆通过以下制备：

取家兔4只，禁食12小时，用一次性采血针自家兔耳缘静脉取血，迅速注入一次性枸橼酸钠抗凝管中，充分混匀，3000r/min离心15min，分离血浆并置于冰浴中备用。

8.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，在步骤c中，加入到通道的血浆的体积为200μL；加入到通道的供试品稀释液或对照品稀释液的体积为200μL；预温时间为100-200s。

9.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，所述供试品稀释液的浓度为0.89～5.0mg·mL^-1，优选地，所述供试品稀释液的浓度为1.33mg·mL^-1和1.77mg·mL^-1。

10.根据权利要求1所述的生物效价检定方法，其中，所述对照品稀释液的浓度为0.48～2mg·mL^-1，优选地，所述对照品稀释液的浓度为0.75mg·mL^-1和1.00mg·mL^-1。