[发明专利]一种蟾酥药材中吲哚类生物碱成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药成分分析检测技术领域，具体涉及一种蟾酥药材中吲哚类生物碱成分的检测方法。

背景技术

2010版《中国药典(一部)》收载蟾酥作为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑眶蟾蜍Bufo melanostictus Schneider的耳后腺及皮肤腺分泌的白色浆液经加工干燥后制得的药材。其性状呈扁圆形团块状或片状，团块状者质坚，不易折断，断面呈棕褐色，角质状，微有光泽；片状者质脆，易碎，断面红棕色，半透明。蟾酥味初甜而后有持久的麻辣感，粉末嗅之作嚏。具有解毒，止痛，开窍醒神的功效，主治痈疽疔疮，咽喉肿痛，中暑神昏，腹痛吐泻等疾病，具有非常良好的疗效。

蟾酥中化学成分复杂，主要成分有蟾蜍甾二烯类、强心甾烯蟾毒类、吲哚碱类、甾醇类以及肾上腺素、多糖、蛋白质、氨基酸和有机酸等。其中，吲哚碱类成分，也称为吲哚类生物碱成分，是蟾酥中非常重要的一类化学成分，具有非常好的提高机体免疫力，并具有一定的抗肿瘤能力。目前，蟾酥中所含的吲哚碱类成分主要有5-羟色胺和5-羟色胺衍生物，其中5-羟色胺和蟾毒色胺作为蟾酥中所含的吲哚类生物碱中两种重要组成成分，非常需要进行定性定量分析。

目前，对于蟾酥中吲哚类生物碱成分，《中国药典》仅通过对二甲氨基苯甲醛显色法进行鉴别，现有技术未收载同时检测5-羟色胺和蟾毒色胺的定量方法及其相关条件。因此，有必要采用优化的前处理及检测条件，建立蟾酥中吲哚类生物碱成分：5-羟色胺和蟾毒色胺的的测定方法，此方法弥补了生物碱类成分依靠显色反应鉴别的专属性不足的缺点，可更全面、有效的控制蟾酥的质量。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种蟾酥药材中吲哚类生物碱成分的检测方法，采用优化条件的前处理和检测方法对2种吲哚类生物碱成分：5-羟色胺和蟾毒色胺的同时进行定性定量分析，进而反映蟾酥药材的内在质量，为蟾酥药材判断真伪、评价优劣、考察稳定性和一致性提供依据。

为实现上述目的，本发明首先提供一种蟾酥药材中吲哚类生物碱成分的检测方法，包括以下步骤：

较佳的，所述蟾酥药材中吲哚类生物碱成分为5-羟色胺和蟾毒色胺。

1)供试品溶液的制备：将蟾酥细粉加入乙醇水溶液，超声提取后，冷却、摇匀；离心，吸取上清液加热蒸干，加入溶剂溶解并定容，过滤膜，取续滤液作为供试品溶液；

较佳的，所述乙醇水溶液为50％乙醇水溶液。具体的，所述50％乙醇水溶液为体积百分数为50％的乙醇。

进一步的，加入的50％乙醇水溶液为蟾酥细粉的100-800倍量。优选的，所述加入的50％乙醇水溶液为蟾酥细粉的200倍量。

具体的，所述加入的50％乙醇水溶液为蟾酥细粉的100-800倍量是指，每0.1g的蟾酥细粉中加入50％乙醇水溶液10-80ml。优选的，当所述蟾酥细粉的重量为0.1g时，所述50％乙醇水溶液的加入量为20ml。

较佳的，所述蟾酥细粉加入乙醇水溶液后，需精密称重。

较佳的，所述超声提取、冷却后，需再称重，并用50％乙醇水溶液补足失重。

较佳的，所述超声提取时间为20-60min。优选的，所述超声提取时间为20min。

较佳的，所述离心时间为20min；所述离心转速为4000rpm。

较佳的，所述吸取上清液加热蒸干是指：将精密吸取的一定体积的上清液置于蒸发皿中，放入恒温水浴中加热、蒸至近干。进一步的，所述吸取上清液的体积为3ml。

较佳的，所述溶解并定容时使用的溶剂为20％乙醇水溶液。具体的，所述20％乙醇水溶液为体积百分数为20％的乙醇。进一步的，所述加入20％乙醇水溶液的定容体积为10ml。

较佳的，所述滤膜为0.45μm滤膜。

所述续滤液是指：过滤膜时，初滤液后的溶液即为续滤液。

2)对照品溶液的制备：将5-羟色胺和蟾毒色胺对照品加入溶剂溶解并定容，摇匀，得到混合对照品溶液；

较佳的，所述对照品溶液中5-羟色胺的CAS号为50-67-9；蟾毒色胺的CAS号为487-93-4。

较佳的，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：5-羟色胺120.0-1800.0μg/ml、蟾毒色胺14.4-216.0μg/ml。

优选的，所述对照品溶液中各成分的含量范围为：5-羟色胺120.0μg/ml、蟾毒色胺14.4μg/ml。