[发明专利]短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法

权利要求书

1.短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法，其特征在于包括如下步骤：首先对寡核苷酸进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，随后用甲醇固定液将寡核苷酸固定在聚丙烯酰胺凝胶上，再用去离子水进行漂洗，然后用SDNAClear Nucleic Acids Stain Dye和SYBR Green II RNA gel stain两种花青素类核酸染料中的一种进行染色，最后用紫外透视仪或凝胶成像仪观察结果。

2.根据权利要求1所述的短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法，其特征在于：所述对寡核苷酸进行聚丙烯酰胺凝胶电泳的具体步骤为：

(1)准备样品：将寡核苷酸配制成100μM的溶液，然后在微量紫外分光光度计上测定其实际浓度；配制甲酰胺加样缓冲液，其配方为：960μl甲酰胺，40μl 250mmol/L EDTA(pH8.0),0.05％(w/v)溴酚蓝；

(2)制作浓度为15-45％(w/v)的变性聚丙烯酰胺凝胶：凝胶中丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺之重量比为19/1，尿素的浓度为4-7M，凝胶的大小为10×10cm，厚度为0.3mm；凝胶和电泳槽缓冲液分别为1XTBE和0.5XTBE；

(3)变性处理：将1μg的寡核苷酸与2-3μl甲酰胺加样缓冲液混匀，于95℃变性30-60秒，迅速插入碎冰中，以破坏寡核苷酸的二级结构；

(4)电泳：将上述已变性的寡核苷酸加样于15-45％(w/v)的变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，电压为200-600V，电泳时间为1-4.5小时，电泳温度为20-30℃。

3.根据权利要求2所述的短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法，其特征在于：所述将寡核苷酸固定是指将凝胶浸入甲醇固定液中，4-30℃浸泡1.5-2小时，甲醇固定液为含有10％(v/v)乙酸的50％(v/v)甲醇溶液，其用量为50ml/胶。

4.根据权利要求3所述的短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法，其特征在于：所述用SDNAClear Nucleic Acids Stain Dye染色是指将2μl SDNAClear Nucleic Acids Stain Dye加入10ml去离子水中，混匀后将凝胶充分浸入其中，不留气泡，常温下浸泡30-60分钟。

5.根据权利要求3所述的短链寡核苷酸甲醇固定花青素染色法，其特征在于：所述用SYBR Green II RNA gel stain染色是指将1μl 10000X的SYBR Green II RNA gel stain加入10ml去离子水中，混匀后将凝胶充分浸入其中，不留气泡，常温下浸泡30分钟。