[发明专利]早期膀胱癌的多靶标检测方法

权利要求书

1.早期膀胱癌的多靶标检测方法，包括下述步骤：

(1)、提取患者尿液中所含的DNA；

(2)、对步骤(1)获得的DNA进行亚硫酸氢盐转化处理；

(3)、通过甲基化特异性荧光定量PCR对EOMES、GDF15、NID2、PCDH17、POU4F2、TCF21、ZNF154这七个标志物基因进行检测，以ALU-C4作为内参基因；

(4)、以步骤(3)中标志物基因的相对甲基化水平值与其检出限之间的大小判定患者是否为早期膀胱癌，当任何一个标志物基因的相对甲基化水平值高于其检出限，该患者为早期膀胱癌患者。

2.根据权利要求1所述的早期膀胱癌的多靶标检测方法，其特征在于，步骤(1)中的DNA总量>500纳克，片段大小>10kb。

3.根据权利要求1所述的早期膀胱癌的多靶标检测方法，其特征在于，步骤(3)中的针对ALU-C4的上游引物序列为SEQ No.1，下游引物序列为SEQ No.2；针对EOMES的上游引物序列为SEQ No.3，下游引物序列为SEQ No.4；针对GDF15的上游引物序列为SEQ No.5，下游引物序列为SEQ No.6；针对NID2的上游引物序列为SEQ No.7，下游引物序列为SEQ No.8；针对PCDH17的上游引物序列为SEQ No.9，下游引物序列为SEQ No.10；针对POU4F2的上游引物序列为SEQ No.11，下游引物序列为SEQ No.12；针对TCF21的上游引物序列为SEQ No.13，下游引物序列为SEQ No.14；针对ZNF154的上游引物序列为SEQ No.15，下游引物序列为SEQ No.16。

4.根据权利要求1或3所述的早期癌症的多靶标检测方法，其特征在于，步骤(3)中针对EOMES、GDF15、NID2、PCDH17、POU4F2、TCF21、ZNF154和ALU-C4的引物联合使用。

5.根据权利要求1所述的早期膀胱癌的多靶标检测方法，其特征在于，步骤(4)的具体过程为：

(a)、用8个基因ALU-C4、EOMES、GDF15、NID2、PCDH17、POU4F2、TCF21、ZNF154的每对引物纯化后的qPCR产物制作标准曲线，做出每对引物的标准曲线；通过标准曲线定出每个基因的实际甲基化的拷贝数；

(b)、将(a)得到的每个拷贝数代入公式一，计算出每一个标志物基因的相对甲基化水平值；

公式一：相对甲基化水平值＝[(gene/ALU)sample/(gene/ALU)Standard]×1000

(c)、步骤(b)所得的标志物基因的相对甲基化水平值高于对应标志物基因的检出限判定为阳性，等于或低于检出限判定为阴性；任一标志物基因为阳性则判定该患者为早期膀胱癌患者。