[发明专利]能源作物荻抗盐基因MsVP2及其植物表达载体和构建方法

权利要求书

1.荻耐盐基因MsVP2，其特征在于该基因的序列为SEQ ID NO.1。

2.荻耐盐基因MsVP2的植物表达载体，其特征在于由权利要求1所述的荻耐盐基因MsVP2与植物表达载体构成。

3.根据权利要求2所述的荻耐盐基因MsVP2的植物表达载体，其特征在于所述的植物表达载体为Sal I和Not I双酶切MsVP2后插入到gateway入门载体pENTR1A，经线性化后与pEarleyGate103表达载体质粒进行重组反应得到。

4.权利要求2或3所述的荻耐盐基因MsVP2植物表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：

1)荻耐盐基因MsVP2的克隆

以荻幼嫩叶片为材料，提取总RNA，反转录为eDNA，设计引物扩增MsVP2基因，上游引物MsVP2-F：5′-ATGATGGAAGAAGACGTGGA-3′

下游引物MsVP2-R：5′-CAAGAATATTGGTGCCATGACC-3′

以反转录的eDNA为模板，以MsVP2-F和MsVP2-R为引物，进行聚合酶链式PCR反应，产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，测定的序列为SEQ ID NO.1；

2)植物表达载体pEarleyGate103-MsVP2的构建

设计引物以荻eDNA为模板，用高保真酶进行PCR反应，在MsVP2基因的上游和下游分别引入Sal I和Not I酶切位点，

上游引物MsVP2-gateway-F：5′-GCGTCGACATGATGGAAGAAGACGT-3′

下游引物MsVP2-gateway-R：5′-TTGCGGCCGCGACAAGAATATTGGTGCCAT-3′

PCR产物连接到pMD19-T Simple载体，转化TOP10感受态细胞，提取阳性质粒，Sal I和Not I双酶切的MsVP2片段与Sal I和Not I双酶切的pENTRlA连接，转化，提取的阳性质粒经NsiI单酶切线性化后与pEarleyGate103载体质粒进行LR重组反应，转化，提取阳性质粒，电泳检测并测序验证为SEQ ID NO.1，植物表达载体pEarleyGate103-MsVP2构建成功。

5.权利要求1所述的荻耐盐基因MsVP2在创建耐盐新种质中的应用。

6.权利要求2所述的植物表达载体在创建耐盐新种质中的应用。