[发明专利]一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒及其提取方法

权利要求书

1.一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒，包括细胞消化液(溶液A)、5％的Chelex-100(溶液B)、GlassMilk、gDNABindingBuffer(溶液C)、TE缓冲液(溶液S)、75％的酒精、及20mg/ml蛋白酶K；所述细胞消化液(溶液A)的组成：由10mMTris-HCL，25mM EDTA，100mMNaCL，0.5％SDS构成，PH8.0；

5％的Chelex-100(溶液B)的配制：称取5gChelex-100，用灭菌的ddH2O定容至100ml；

溶液C的组成：gDNABindingBuffer(6MNaI)；

溶液S的组成：TE缓冲液,PH值为7.0。

2.一种快速从阿胶中提取DNA的方法，其特征在于用权利要求1所述试剂盒提取阿胶DNA，具体实施步骤如下：

步骤一，试剂配制及实验器材准备：消化缓冲液配制，准备2ml离心管，在高压灭菌锅中进行灭菌，备用；

步骤二，用消化液消化分解蛋白：用移液枪吸取200-300μl的阿胶液体产品(如阿胶浆)，至2ml无菌离心管中，取0.3-0.5mg食阿胶羹，液氮研磨成粉末状至2ml无菌离心管中，并向其中加入400ul细胞消化液(溶液A)，加入380μl5％的Chelex-100(溶液B)，然后置于50-60度水浴中保温，期间不时轻轻搅拌混匀，直到胶状状物全部溶解，待溶液冷却至室温后，加入20mg/ml蛋白酶K20μl，混匀，56℃放置1h，期间不时轻微摇匀。

步骤三，核酸释放：高速震荡5-10S，100℃8min；

步骤四，核酸纯化：12000rpm，离心10min，吸取上清转至新的EP管中，加入等体积氯仿(约1ml)，充分混匀，12000rpm离心10min，小心将上清转至新的EP管中；向收集液体中加入GlassMilk5μl,加600ulgDNABindingBuffer(溶液C),充分混匀，65℃水浴15min，中间要反转几次；室温放置5min，中间要反转几次；4000rpm离心1min，弃上清，留管底；70％酒精500ul洗涤8000r/min离心1min，重复此步骤2次；加入500μl无水乙醇，；吹打悬浮，洗涤8000r/min离心1min，弃上清；8000r/min离心30S，用10μl移液器吸走残余液体，室温干燥10min；

步骤五，洗脱DNA:加50μlTE缓冲液(溶液S，PH7.0)，70℃5min水浴，12000rpm，离心1min，吸取上清转移至新的离心管中，-20℃保存；

步骤六，DNA质量检测：用Nanodrop紫外分光光度计检测DNA浓度及纯度，85％以上所获得的基因组DNA浓度值处于45-100ng/μl之间，OD_260/280值处于1.8-2.0之间；

步骤七，特异性基因的选择：选择16SrDNA基因作为研究对象，在GeneBank中查找该基因序列，设计驴和马的特异性通用引物；

步骤八，PCR扩增及测序：选择合适的PCR体系和反应条件，进行PCR扩增，对其产物使用PCR纯化试剂盒进行纯化，测序；

步骤九，基因比对：测序所得基因序列，进入NCBI数据库中Blast比对，可以进行后续的分子生物学分析。