[发明专利]一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒及其提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别是涉及一种从阿胶中快速高效提取DNA的方法及其试剂盒。

背景技术

阿胶为马科动物驴的去毛之皮经熬制而成的胶状物，其医疗保健价值广泛，具有补血养血、美容养颜、延年益寿、强筋健骨，增强免疫力等五大功能优势，因此阿胶作为一种保健食品在市场上占有重要的位置，深受消费者的青睐。然而，随着胶类市场的不断发展，随着熬胶原料供应的紧张和原料价格上涨，不法分子为了降低成本，在制备阿胶过程中，部分或全部掺入马皮、牛皮、猪皮、骡子皮或其他动物杂皮进行熬制，通过这种方式熬制成的“假阿胶”在外观及质地上都与真正阿胶极其相似，并且价格低廉。这类伪品的存在不仅危害整个阿胶市场，而且损害了消费者的利益，甚至有些“假阿胶”还存在有毒物质，不但损害了消费者的健康，还严重破坏了我国传统中药保健品的形象，不利于我国阿胶事业的健康发展。所以我们急需建立一种高效、可靠地方法来鉴定阿胶真伪。

传统鉴别阿胶的方法主要通过观察产品外观，颜色，气味等来实现，然而跟驴皮同源性很近的骡子和马皮熬制出来的阿胶很难用传统方法来辨别真伪。近年来随着分子生物学技术的发展，一些基于DNA的生物学鉴定手段逐渐丰富起来，公开号为CN1605868A的专利采用PCR-RFLP鉴定驴皮等动物皮，但该方法只适用于动物皮而不适合成品阿胶鉴定，阿胶经过高温高压长时间作用，其DNA含量很少，均已降解为小片段，很难扩增出长片段的PCR产物。公开号为CN101270357A的专利提供一种从深加工型中药或中药材中提取DNA的方法，但该方法需要用50ml离心管大量原料，费时费力，而且必须使用进口商业化试剂盒提取，实验成本高。

为了克服上述现有技术的不足，针对阿胶中蛋白含量极高，DNA含量低，且经过高温熬煮等层层加工高度降解这些特点，本发明在现有的DNA提取方法基础上，做出了有针对性的调整和改进。本发明提供了一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒及其提取方法。该方法简便，快捷，有效，能够从各种类型的胶类产品中提取出纯度高、产量多并且能够进行后续更高级别的分子生物学实验的微量DNA提取技术，为阿胶及其相关产品的源性鉴定奠定了基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒及其提取方法。

为实现上述目的，本发明首先提供了一种从阿胶中快速提取DNA的试剂盒，包括细胞消化液(溶液A)、5％的Chelex-100(溶液B)、GlassMilk、gDNABindingBuffer(溶液C)、TE缓冲液(溶液S)、75％的酒精、及蛋白酶K。

(1)细胞消化液(溶液A)：由10mMTris-HCL，25mM EDTA，100mMNaCL，0.5％SDS构成，pH＝8.0；

(2)5％的Chelex-100(溶液B)：称取5gChelex-100，用灭菌的ddH2O定容至100ml

(3)玻璃奶GlassMilk适量

(4)溶液C：gDNABinding Buffer(6MNaI)

(5)氯仿

(6)溶液S：TE缓冲液,PH值为7.0

(7)70％酒精:35ml无水乙醇定容至50ml。

(8)20mg/ml蛋白酶K

(9)无水乙醇

(10)双蒸水

本发明还提供了从阿胶中快速提取DNA的一种方法，具体实施步骤如下：

步骤一，试剂配制及实验器材准备：消化缓冲液配制，准备2ml离心管，在高压灭菌锅中进行灭菌，备用；

步骤二，用消化液消化分解蛋白：用移液枪吸取200-300ul的阿胶液体产品(如阿胶浆)，至2ml无菌离心管中，取0.3-0.5mg食阿胶羹，液氮研磨成粉末状至2ml无菌离心管中，并向其中加入400ul细胞消化液(溶液A)，加入380ul5％的Chelex-100(溶液B)，然后置于50-60度水浴中保温，期间不时轻轻搅拌混匀，直到胶状状物全部溶解，待溶液冷却至室温后，加入20mg/ml蛋白酶K20ul，混匀，56℃放置1h，期间不时轻微摇匀。

步骤三，核酸释放：高速震荡5-10s，100℃8min；