[发明专利]一种重组人CYTL1蛋白的表达方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白质的表达方法，具体涉及一种重组人CTYL1蛋白的表达方法和用途。

背景技术

关节软骨是一种独特的结缔组织，由软骨细胞和软骨基质组成，软骨损伤的修复依赖软骨细胞分泌来完成。由于软骨组织内无血管，软骨细胞被嵌入由Ⅱ型胶原和蛋白多糖组成的致密的固体基质中，无法移动到缺损部位，因此，即使是很小的缺损也难以自行修复。关节软骨损伤在临床上较常见，目前对其治疗分为预防和对症治疗两种，有症状的病人可用药物和手术治疗进行干预，但这些手段并不能从根本上阻止病情的发展，因此人们一直在积极寻找更有效的治疗与预防措施。

细胞因子是由造血系统、免疫系统或炎症反应中的活化细胞产生，能调节刺激细胞分化增殖和诱导细胞发挥功能，是高活性多功能的多肽、蛋白质或糖蛋白，对机体抗御疾病、维持生理功能及促进组织器官的修复与再生等方面具有重要意义。自从1957年世界上第一种高效干扰病毒繁殖的细胞因子-干扰素被发现以后，细胞因子以其高度生物学活性、高特异性作用等优点受到医学及生物学领域的高度重视，至今相继发现了几十种生长因子并应用于临床，获得了良好的防治效果。

在软骨修复研究领域中，主要应用的细胞因子包括骨形态发生蛋白(BMP)、胰岛素样生长因子(IGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、软骨调节素(ChM)等。目前，该种类细胞因子作用复杂，并具有多重调节作用，在促进软骨组织修复的同时，也容易做成其他组织的增生(如纤维组织)，导致新生软骨组织骨化或纤维化，影响再生组织的生物学功能。此外，商品化的外源性细胞因子多依赖国外进口，价格十分昂贵。

在鼠的动物模型研究中发现了一种新型的生长因子-类细胞介素1(Cytokine-like1,CYTL1)对软骨的生成具有独特的调控作用，主要在软骨细胞和软骨组织中表达，在骨髓间充质干细胞中(Mesenchymal Stem Cells,MSC)表达量很低，能诱导MSC向软骨细胞方向转化，在软骨形成后CYTL1含量明显增加(Kim JS等，J Biol Chem.2007)。CYTL1通过刺激Sox9转录活性来增加软骨生成；并能提高胰岛素样生长因子的表达，进一步促进软骨组织再生。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供了一种重组人CYTL1蛋白的表达方法，还提供了采用该方法表达的重组人CYTL1蛋白以及所述重组人CYTL1蛋白的用途。

为实现上述目的，所采取的技术方案：一种重组人CYTL1蛋白的表达方法，所述方法为将SEQ ID:NO.1进行原核表达。SEQ ID:NO.1为人CYTL1蛋白CDS中去除信号肽序列后剩余的DNA序列，SEQ ID:NO.1如下：

ACTCCCCCGACCTGCTACTCCCGCATGCGGGCCCTGAGCCAGGAGATCACCCGCGACTTCAACCTCCTGCAGGTCTCGGAGCCCTCGGAGCCATGTGTGAGATACCTGCCCAGGCTGTACCTGGACATACACAATTACTGTGTGCTGGACAAGCTGCGGGACTTTGTGGCCTCGCCCCCGTGTTGGAAAGTGGCCCAGGTAGATTCCTTGAAGGACAAAGCACGGAAGCTGTACACCATCATGAACTCGTTCTGCAGGAGAGATTTGGTATTCCTGTTGGATGACTGCAATGCCTTGGAATACCCAATCCCAGTGACTACGGTCCTGCCAGATCGTCAGCGCTAG。

其对应的氨基酸序列如下：

TPPTCYSRMRALSQEITRDFNLLQVSEPSEPCVRYLPRLYLDIHNYCVLDKLRDFVASPPCWKVAQVDSLKDKARKLYTIMNSFCRRDLVFLLDDCNALEYPIPVTTVLPDRQR

优选地，所述原核表达中PCR扩增引物是：

正向引物：5’-GAAAAGCTTCACACTCCCCCGACCTGCTACT-3’；

反向引物：5’-TATAGAATTCCTAGCGCTGACGATC-3’。

优选地，所述原核表达中选用的双酶切位点分别为Xmn I和EcoR I酶切位点。

优选地，所述原核表达中原核表达载体为pFL-B13cl。

优选地，所述原核表达中宿主菌为E.coli BL21(Gold)(DE3)。

优选地，所述原核表达中采用IPTG诱导表达，IPTG终浓度为0.05～0.1mM，培养温度为37℃。