[发明专利]一种海洋中石油烃浓度的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及海洋环境有毒物质浓度研究领域，尤其涉及一种对海洋中石油烃浓度的生物检测方法。

背景技术

石油烃是由碳氢化合物组成的复杂混合体，主要由烃类组成，尤其是轻芳香烃物质及其衍生物。石油烃对海洋生物具有毒性，主要是使生物的营养与输导产生混乱，高浓度时甚至会导致生物大量死亡，对海洋生态系统可造成极大的破坏。特别是高环芳烃毒性最强，有些组分具有致癌性，能使鱼产生油臭味，油粘在鱼鳃上或鱼卵上，很快会使之窒息死亡，或使孵化受到影响，更主要的危害是，其中含有致癌烃，被鱼贝富集以后，会通过食物链危害人体健康。近年来海上石油开采和运输事故频频发生，加之海上轮船运输业的快速发展以及工业、生活污水的大量排放，海洋环境中石油烃污染日益严重，甚至已经威胁到海洋生物的生存。

可口革囊星虫俗称海丁、海玛蝗、沙虫、泥蒜、土笋等，隶属于星虫动物门、革囊星虫纲、革囊星虫目、革囊星虫科、革囊星虫属

，为我国的特有种，广泛分布于浙江、福建、广东、广西和海南等省区。可口革囊星虫是海洋渔业资源中具有重要经济意义的种类，近年来由于沿海环境污染加剧以及人们过度采捕，造成资源严重衰退，因此，可口革囊星虫的资源保护已经开始受到人们的重视。

目前，研究海洋中石油烃浓度的方法有很多，主要有紫外分光光度法、重量法、红外光度法、荧光分光光度法和气象色谱法等。紫外分光光度法由于灵敏度低，对饱和烃、环烃无效，比较适于高浓度样品中石油烃浓度的测定。重量法研究流程长，灵敏度低，只适合测定含油量在10mg/L以上的水样，而且在提取和溶剂蒸发过程中容易挥发掉，方法的精密度随操作条件和操作员的熟练程度不同而差别很大。红外光度法包括非色散红外吸收光度法和红外光谱法两个部分，其中前者的优点是仪器结构简单，测量具有较好的重现性，缺点是只能研究石油烃中的直链烷烃和环烷烃，不能研究苯系物，后者能准确地测量出石油烃的总浓度，但是在测定鱼贝中石油烃的浓度时，若鱼贝中动物油脂有残留，则极容易受到干扰。荧光分光光度法研究石油烃浓度的灵敏度非常高，但是它仅能测定石油烃中苯系物的浓度，无法测定石油烃中直链烷烃和直链烷烃的浓度，而且不同物质的荧光发射强度差异很大，测定结果受样品中油品组成影响很大。气相色谱法是将石油烃色谱柱分离后，分别研究不同的石油烃组分，灵敏度高，但是由于石油烃组成十分复杂，不适合石油烃总浓度的测定。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种对海洋中石油烃浓度的检测方法，这种检测方法适用范围广，实验流程短，安全性好，灵敏度和准确性高。

本发明所采用的技术方案是：

一种海洋中石油烃浓度的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将健康的可口革囊星虫分别与添加有不同已知浓度的石油烃和待测样品的培养液共培养一定时间；

检测不同培训条件下可口革囊星虫的体腔液细胞DNA损伤状况，根据已知石油烃的浓度确定DNA损伤状况与石油烃浓度之间的数值关系；     2）根据确定的数值关系计算待检样品中石油烃的浓度。

优选地，所述数值关系使用绘制标准曲线的方式来确定。   

优选地，所述培养液的配置步骤为：将原油和经过滤灭菌后的天然海水按比例混合，接着超声分散后静置，吸取下层水相作为母液，将母液冷冻保存，用石油烃母液加一定量的海水配制等体积的若干个梯度浓度的石油烃溶液，随后加等量的同一批海泥混匀。

优选地，所述原油和经过滤灭菌后的天然海水的比例为1:10—1:8，所述超声分散时间为1h—1.5h，静置时间为4—5h，冷冻温度为3℃—4℃，所述梯度浓度个数为6—8个。

优选地，所述培养方法为：将体重2~3g的可口革囊星虫，在装有湿海泥的塑料桶中养一周待其状态稳定，取健康的可口革囊星虫随机分组，每组20只分别放入所配制的石油烃培养液中培养7d~10d，试验期间水温稳定为20℃~25℃，并在实验的第0、1、2、4、7天，获取可口革囊星虫的体腔液细胞。

优选地，所述DNA损伤状况的检测方法为单细胞凝胶电泳分析，其包括采用三层铺胶法制片、细胞裂解、解旋及电泳、中和、染色、镜检6个步骤。

优选地，所述口革囊星虫体腔液细胞细胞DNA的损伤状况分析采用SPSS软件统计分析。