[发明专利]一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法。

背景技术

传统的含血清培养基中的血清给科研和生产等带来多种不利因素。血清的主要作用在于给细胞提供生长增值所需的激素、生长因子、转移蛋白和其他营养物质，但其存在很多缺点：批间差异较大、需要大量验证工作、使用不方便、成分不明确、有抑制生长的成分、尤其不利于疫苗和单克隆抗体等目的产物的分离纯化、容易被病毒和支原体感染；血清昂贵可能发生供应紧张，血清的来源不稳定等问题。

近年来，国内开始针对CHO细胞无血清培养开发了许多无血清培养基产品，但是大多数均为了保证细胞的活性，在已有DMEM，DMEM/F12，IMDM等基础培养基的基础上添加了不同来源的蛋白质等添加剂，由于成分复杂，蛋白质及其水解产物会在细胞培养过程中带来污染，影响下游分离纯化，目的产物表达量降低。

国外商品化的CHO细胞无血清培养基存在如下现状：大多以液体的形式提供，不适合大规模生产、价格昂贵、培养基成分配方不确定，Sigma、In-vitrogen、Hyclone和Lonza等国际知名培养基，每升价格高达上千元，在一定程度上限制了它的实际应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种CHO细胞无血清培养基及其制备方法，通过加入化学成分明确的多种氨基酸、维生素、无机盐、微量元素及生物碱、脂肪酸及激素等补充因子，使该培养基能使CHO细胞在悬浮培养条件下无需适应即可快速生长，细胞密度和细胞活性都可以与有血清培养基相当，既能满足CHO细胞培养需求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素，降低生产成本，可完全取代有血清培养基进行CHO细胞的大规模培养和生产。另外，通过采用粉末状保存的方式，可以有效规避产品运输风险，降低运输成本，满足对CHO细胞进行规模化培养生产的需求。

本发明的技术方案为：

一种CHO细胞无血清培养基，其中，包括下列重量份的组分：

氨基酸组合物  1300-2000；

维生素组合物  12-25；

无机盐组合物  10-15；

微量元素组合物  0.005-0.006；

无菌水  900-1100。

优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述氨基酸组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：

丙氨酸7.35-31.5、精氨酸152.13-211.5、天冬酰胺40.26-250.48、半胱氨酸38.26-45.12、谷氨酸8.14-32.51、甘氨酸8.14-30.45、组氨酸30.48-105.98、异亮氨酸53.41-131.25、亮氨酸58.94-167.23、赖氨酸91.25-193.26、甲硫氨酸15.26-61.42、苯丙氨酸34.12-83.56、脯氨酸17.34-35.41、丝氨酸27.31-95.15、苏氨酸54.16-97.24、色氨酸8.27-52.41、酪氨酸57.21-145.13、缬氨酸53.25-118.31和谷氨酰胺583.41-1248.93；

其中所述氨基酸均为L-氨基酸。

优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述维生素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：

维生素B6 0.01-0.2、维生素B12 0.02-0.42、维生素C9-10、维生素E0.30-0.31、生物素0.4-1.21、氯化胆碱0.064-0.072、D-泛酸钙0.004-0.005、叶酸0.062-0.081、肌醇0.83-1.43、烟酰胺0.17-0.20、吡哆醇盐酸盐0.0015-0.0017、核黄素0.06-0.29、腐胺二酸盐0.00501-0.00503、氢化可的松0.0015-0.0018和吡哆醛.HCL1.01-9.48。

优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述无机盐组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：

碳酸氢钠2440-2451、氯化钠6995.50-7031.20、氯化钾312.81-313.90、氯化镁29.65-30.42、硫酸镁48.85-49.21、一水磷酸二氢钠62.51-62.53、磷酸氢二钠71.03-72.15、硫酸锌0.431-0.445、氯化钙116.60-117.32、五水硫酸铜0.0014-0.0016和七水硫酸铁0.062-0.071。

优选的是，所述的CHO细胞无血清培养基中，所述微量元素组合物包括下列重量份的组分中的一种或几种：