[发明专利]一种通城虎茎段的繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通城虎茎段的繁殖方法。

背景技术

通城虎为马兜铃科植物，又名五虎通城、定心草、天然草、学萎、血藤暗消，草质藤本，根圆柱形，细长，茎无毛，干后常有纵棱；味苦、辛，性温，有小毒，有解毒消肿、祛风镇痛、行气止咳之效，主治风湿骨痛、胃脘痛、腹痛、咽喉炎、跌打损伤、小儿惊风、毒蛇咬伤。产于广西(陆川、苍梧、昭平)、广东(博罗、德庆、阳春等)、江西(德兴)、浙江和福建等地，野生的通城虎常生于山谷林下灌丛中和山地石隙中，对生长环境要求较为严格，因此地域分布范围相当有限，近年来随着市场需求量的不断增加，对野生资源的采集量逐渐增大，野生通城虎资源濒临枯竭。利用组织培养快繁技术，可以有效快速的增加其繁殖系数，不仅能满足市场对通城虎药材的需求，又有利于通城虎资源的保护。

发明内容

本发明设计开发了一种通城虎茎段的繁殖方法。本发明中通过通城虎茎段的快速繁殖方法，能够快速繁殖出大量适合移栽的优良通城虎种苗、满足生产需要。

本发明提供的技术方案为：

一种通城虎茎段的繁殖方法，包括：

步骤(1)、制作通城虎外植体；

步骤(2)、利用诱导培养基培养外植体，待外植体萌发后获得试管苗，诱导培养基中含0.5-2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤；

步骤(3)、利用增殖培养基培养试管苗，得到试管苗丛生芽，增殖培养基中含0.5-1.0mg/L的激动素、0-0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0-0.2mg/L的吲哚丁酸；

步骤(4)、利用壮苗培养基培养试管苗丛生芽，得到健壮试管苗，壮苗培养基中含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.3-0.5mg/L的吲哚丁酸；

步骤(5)、利用生根培养基培养健壮试管苗，得到带根的试管苗，试管苗根长2-4cm，生根培养基中含0.5mg/L的吲哚丁酸和0-1.0mg/L的萘乙酸；

步骤(6)、炼苗，移栽至基质中培养。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(2)中，诱导培养基中含1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤；所述步骤(3)中，增殖培养基中含0.5mg/L的激动素、0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.2mg/L的吲哚丁酸；所述步骤(4)中，壮苗培养基中含0.2mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的吲哚丁酸；所述步骤(5)中，生根培养基中含0.5mg/L的吲哚丁酸和0.6mg/L的萘乙酸。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(6)中，基质由腐殖土、蛭石和椰糠按照体积比3∶1∶1混合组成。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述诱导培养基、增殖培养基和壮苗培养基均采用MS培养基，生根培养基采用1/2MS培养基，诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基和生根培养基均含有4.5g/L的琼脂和25g/L蔗糖，pH值均为5.8。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(1)中，选取通城虎植株上带顶芽的嫩茎段或带一个腋芽的嫩茎段作为外植体。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(1)中，对外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用体积浓度为1％的洗洁精水溶液浸泡5-10min，自来水冲洗15-30min，无菌水润洗一次，然后用体积浓度为75％的酒精浸泡30-50s，再用添加了2-3滴吐温-20的质量浓度为0.1％的升汞溶液消毒6-8min，最后用无菌水冲洗3-5次。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(2)中，培养温度为24-26℃，光照强度为1500lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；所述步骤(3)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养30天；所述步骤(4)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养21天；所述步骤(5)中，培养温度为24-26℃，光照强度为2000lux，光照时间为10-12小时/天，培养21天。

优选的是，所述的通城虎茎段的繁殖方法中，所述步骤(6)中炼苗的具体过程为：将带根的试管苗连同培养瓶移出培养室，转入大棚，在温度为25-27℃的条件下放置7天，然后打开瓶盖，在瓶中加入自来水，炼苗3-4天。