[发明专利]一种白花杜鹃组织培养的方法

权利要求书

1.一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：

1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成2-3cm的茎段；

2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30-35℃处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min；随后在超净工作台上以70-75％的酒精消毒25-35秒，0.1％升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用；

3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2-3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-3000Lx、光周期10-14h/d,温度25℃±2℃；培养6-8d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0.3-0.6mg/L+NAA0.1-0.3mg/L；

4)增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强2500-3000Lx、光周期10h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的培养基组成MS+6-BA0.4-0.6mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+IBA0.8-1.2mg/L+KT0.8-1.2mg/L。

5)生根培养：将步骤4)的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强2500-3000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+IBA0.2-0.5mg/L+PVP5-10mg/L；

6)炼苗和移栽：将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25℃，湿度70％-80％，适当遮荫即可；

所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO₃1900mg/L，硝酸铵NH₄NO₃1650mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H₂O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl₂·2H₂O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H₃BO₃6.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H₂O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H₂O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H₂O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H₂O0.025mg/L，氯化钴CoCl₂·6H₂O0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO4·7H₂O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.7；

所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO₃950mg/L，硝酸铵NH₄NO₃825mg/L，磷酸二氢钾KH₂PO₃85mg/L，硫酸镁MgSO4·7H₂O185mg/L；余同上述MS培养基；

所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤；

所述的NAA为α-萘乙酸；

所述的IBA为吲哚-3-丁酸；

所述的KT为激动素；

所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。

2.根据权利要求1所述一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述步骤3)中初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。

3.根据权利要求1所述一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述步骤4中增殖培养用培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+IBA1.0mg/L+KT1.0mg/L。4根据权利要求1所述一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述步骤6)中生根用培养基为：1/2MS+IBA0.4mg/L+PVP8mg/L。