[发明专利]一种鲍铁蛋白的粗提方法

权利要求书

1.一种鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 取除性腺外的鲍组织，加入SB缓冲液，匀浆，得匀浆液；

(2)匀浆液置于液氮和水浴中反复冻融；

(3)用SB缓冲液定容至总体积100mL，混匀后冷冻离心，收集上清液；

(4) 上清液经滤膜过滤，离心，弃上清，加入SB缓冲液重悬沉淀物得重悬液；

(5) 将重悬液加到离心管中的CsCl密度梯度液的液面上，离心，弃上清，得红褐色的铁蛋白。

2.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(1)中鲍组织与SB缓冲液之间的质量体积比为1﹕2~1﹕50。

3.根据权利要求1或2所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述中SB缓冲液的pH为6.0~8.0，含有0.1~0.3M NaCl，20~100mM Tris-HCl，1~20mM CaCl₂，1~20mM MgCl₂。

4.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(2)中匀浆液置于液氮和水浴中反复冻融的次数为3次，水浴温度为20~80℃。

5.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(3)中冷冻离心是采用高速冷冻离心机依次以转速1000~5000rpm、6000~8000rpm、9000~10000rpm和11000~14000rpm对定容后的溶液离心10~60min。

6.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(4)中滤膜孔径为0.22~0.45um。

7.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(4)中对滤膜过滤所得的上清液使用超速离心机以转速15000~40000rpm离心0.5~3h。

8.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(4)中用于重悬的SB缓冲液的量为0.5~3mL。

9.根据权利要求1所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(5)中，CsCl密度梯度液采用SB缓冲液配置，从离心管管底到管顶的溶液质量比分别为40~60%、30~40%、20~30%、10~20%。

10.根据权利要求1或9所述的鲍铁蛋白的粗提方法，其特征在于，所述步骤(5)中使用超速离心机以转速15000~40000rpm离心0.5~3h。