[发明专利]原始卵泡激活剂及其应用

权利要求书

1.原始卵泡激活剂，其特征在于由mTOR信号通路激活剂和PI3K信号通路激活剂组成，所述mTOR信号通路激活剂包括mTOR信号通路激活剂I和II，mTOR信号通路激活剂I为50-200μM磷脂酸，mTOR信号通路激活剂II为20-50μM普萘洛尔；所述PI3K信号通路激活剂包括PI3K信号通路激活剂III和IV，PI3K信号通路激活剂III为30-100μM的bpV，PI3K信号通路激活剂IV为250-500μg/mL的740Y-P。

2.根据权利要求1所述原始卵泡激活剂，其特征在于所述磷脂酸为200μM，普萘洛尔为50μM，所述bpV为30μM，740Y-P为250μg/mL。

3.权利要求1或2所述原始卵泡激活剂在制备激活原始卵泡并促进卵泡发育药物中的应用。

4.原始卵泡体外激活试剂盒，其特征在于，包括以下组分：

1）mTOR信号通路激活剂I和II；

2）PI3K信号通路激活剂III和IV；

3）基本激活细胞培养液；

4）L-15培养液。

5.根据权利要求4所述的原始卵泡体外激活试剂盒，其特征在于mTOR信号通路激活剂I为磷脂酸，其浓度为：50-200μM；mTOR信号通路激活剂II为普萘洛尔，其浓度为：20-50μM； PI3K信号通路激活剂III为bpV，其浓度为30-100μM； PI3K信号通路激活剂IV为740Y-P，其浓度为250-500μg/mL；基本激活细胞培养液配方：MEMa为母液，内含丙酮酸钠0.23mM、人血清白蛋白10 wt. %、L-抗坏血酸50μg/mL、链霉素50mg/L和青霉素75mg/L。

6.根据权利要求5所述的原始卵泡体外激活试剂盒，其特征在于，试剂组成为：

溶液I：基本激活细胞培养液；

溶液II：L-15培养液为母液，内含人血清白蛋白10 wt.%;

试剂I：mTOR信号通路激活剂I和II，含有50-200μM 的磷脂酸和20-50μM的普萘洛尔，按照10mL基本激活细胞培养液的剂量分别预先分装；

试剂II：PI3K信号通路激活剂III和IV，含有30-100μM的的bpV和250-500μg/mL的的740Y-P，按照10mL基本激活细胞培养液的剂量分别预先分装。

7.根据权利要求5所述的原始卵泡体外激活试剂盒，其特征在于，试剂组成为：

溶液I：基本激活细胞培养液；

溶液II：L-15培养液为母液，内含人血清白蛋白10 wt.%;

试剂I：预混在一起的mTOR信号通路激活剂I和II，含有50-200μM 的磷脂酸和20-50μM的普萘洛尔，按照10mL基本激活细胞培养液的剂量预先分装；

试剂II：预混在一起的PI3K信号通路激活剂III和IV，含有30-100μM 的PA和250-500μg/mL的740Y-P，按照10mL基本激活细胞培养液的剂量预先分装。

8.根据权利要求6或7所述的原始卵泡体外激活试剂盒，其特征在于将溶液I、试剂I、试剂II、溶液II分别包装，再一同包装在同一包装盒内。

9.权利要求6或7所述原始卵泡体外激活试剂盒的制备方法，其特征在于溶液I：基本激活细胞培养液配制方法如下：MEMa为母液，含有丙酮酸钠0.23mM、人血清白蛋白10wt.%、L-抗坏血酸50μg/mL、链霉素50mg/L和青霉素75mg/L；所述试剂I含有mTOR信号通路激活剂包括：(1) mTOR信号通路激活剂I，50-200μM 的磷脂酸，(2) mTOR信号通路激活剂II，20-50μM的普萘洛尔；所述试剂II含有PI3K信号通路激活剂包括：(1) PI3K信号通路激活剂I，30-100μM 的PA，(2) PI3K信号通路激活剂II，250-500μg/mL的740Y-P；溶液II的配制方法如下：L-15培养液为母液，还含有人血清白蛋白10wt.%。

10.权利要求6或7所述非诊断治疗目的原始卵泡体外激活试剂盒的应用方法，其特征在于步骤如下：

1）取卵巢皮质于5mL溶液II，将卵巢皮质切割成1mm³的小块，用溶液II反复清洗；

2）取1mL溶液I与试剂I混合，待试剂I完全溶解后，用溶液I配制成10mL的激活细胞培养液；

3）将卵巢皮质培养于含有悬浮小网的24-孔板，在小网下方加入400μL 激活细胞培养液，培养24小时，培养条件为37℃，5%CO₂；

4）24h后，取1mL溶液I与试剂II混合，待试剂II完全溶解后，用溶液I配制成10mL的激活细胞培养液；

5）将培养板中的培养液吸干，加入新配置的激活培养液，继续培养24小时，培养条件为37℃，5%CO₂；

6）24小时后，激活过程完成，组织可用于后续操作。