[发明专利]原始卵泡激活剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种原始卵泡激活剂及其应用，特别涉及一种mTOR和PI3K信号通路激活剂在原始卵泡体外激活试剂盒中的应用。

背景技术

在哺乳动物中，生殖细胞的生长和成熟是一个受到激素精细调节的过程。这些激素包括来自下丘脑的促性腺激素和生殖器官自身产生的激素和生长因子等。在雌性哺乳动物体内，卵泡是一个卵巢的基本功能单位，由位于中央的卵子及外围一层或多层颗粒细胞构成。按照卵泡中卵母细胞的不同生长发育阶段，可以分为原始卵泡，初级卵泡，次级卵泡，腔卵泡，排卵前卵泡。原始卵泡是卵巢中处于静息状态的卵泡库，在哺乳动物出生前或出生后，其数量是固定的，人每个卵巢中的原始卵泡大约有400，000左右。在卵巢的生长发育过程中，卵巢中的原始卵泡不停的被激活，进入生长期经过初级卵泡和次级卵泡阶段。在次级卵泡阶段，在初情期前没有促性腺激素(FSH)分泌的情况下，这些卵泡就会死亡而发生卵泡闭锁，而初情期后，在下丘脑分泌的FSH的刺激下，就会有一个或数个次级卵泡周期性的进一步发育长大直至排卵前卵泡。在这个过程中卵母细胞的体积会增长几百倍，周围颗粒细胞数量也会迅速增加，由最初的单层6-9个细胞增加至数层上千个细胞。除了下丘脑分泌的促性腺激素外，卵泡的发育也受到卵巢内部产生的激素和生长因子的影响，比如在卵泡内卵母细胞和周围的颗粒细胞就可以通过旁分泌的形式互相影响对方的生长发育。最终在排卵前激素峰的总用下，排卵前卵泡中卵母细胞成熟而排卵，而残留的颗粒细胞和theca细胞则发生黄体化，分泌激素为受精卵的发育做准备。

在哺乳动物的卵巢中，原始卵泡库中不停有原始卵泡被激活而进入生长期，这个过程被称为初始招募(initial recruiment)。初始招募并不受FSH的调节，而是受卵巢产生的一些生长因子的影响。许多生长因子都被发现参与了这个过程如PDGF，SDF，EGF等。在人每个月大约有1000个左右的原始卵泡进入生长期，而当原始卵泡库中的原始卵泡不足于1000时，卵巢将不再排卵，而此时女性也将进入绝经期。正常女性进入绝经期的年龄都在50岁左右，而在一些病理条件下，由于卵巢中原始卵泡库中储备不足而令女性提前进入绝境期(40岁之前)而引起卵巢早衰。卵巢早衰是一种非常常见的不孕不育症，在育龄女性中的发病率大概在1％。目前，关于原始卵泡激活的机制研究还不是特别清楚，除了上述提到的一些生长因子，科学家们通过基因敲除小鼠的研究，发现信号通路PTEN-PI3K-FOXO3以及mTOR-p70S6K-rpS6在原始卵泡的激活中发挥重要的作用。因此如何找到一个有效的办法调节原始卵泡的激活将具有非常重要的意义。

发明内容

解决的技术问题：本发明提供一种原始卵泡激活剂及其应用，本发明的另一目的是提供一种原始卵泡体外激活试剂盒。

技术方案：原始卵泡激活剂，由mTOR信号通路激活剂和PI3K信号通路激活剂组成，所述mTOR信号通路激活剂包括mTOR信号通路激活剂I和II，mTOR信号通路激活剂I为50-200μM磷脂酸，mTOR信号通路激活剂II为20-50μM普萘洛尔；所述PI3K信号通路激活剂包括PI3K信号通路激活剂III和IV，PI3K信号通路激活剂III为30-100μM的bpV，PI3K信号通路激活剂IV为250-500μg/mL的740Y-P。

上述磷脂酸优选为200μM，普萘洛尔优选为50μM，所述bpV优选为30μM，740Y-P优选为250μg/mL。

上述原始卵泡激活剂在制备激活原始卵泡并促进卵泡发育药物中的应用。

原始卵泡体外激活试剂盒，包括以下组分：1)mTOR信号通路激活剂I和II；2)PI3K信号通路激活剂III和IV；3)基本激活细胞培养液；4)L-15培养液。

一种原始卵泡体外激活试剂盒，mTOR信号通路激活剂I为磷脂酸，其浓度为：50-200μM；mTOR信号通路激活剂II为普萘洛尔，其浓度为：20-50μM；PI3K信号通路激活剂III为bpV，其浓度为30-100μM；PI3K信号通路激活剂IV为740Y-P，其浓度为250-500μg/mL；基本激活细胞培养液配方：MEMa为母液，内含丙酮酸钠0.23mM、人血清白蛋白10wt.％、L-抗坏血酸50μg/mL、链霉素50mg/L和青霉素75mg/L。

一种原始卵泡体外激活试剂盒，试剂组成为：

溶液I：基本激活细胞培养液；

溶液II：L-15培养液为母液，内含人血清白蛋白10wt.％；