[发明专利]牦牛皮降血压胶原蛋白多肽及其制备方法

权利要求书

1.牦牛皮降血压胶原蛋白多肽，其特征在于，按照下述步骤进行：

步骤1，牦牛皮的脱毛，即将牦牛皮置于水中清洗除去表面杂质，在剪去折干牦牛皮上的毛后在60～80℃温水中浸泡牦牛皮4～48h，机械彻底脱毛，清水冲洗，清除毛屑，将皮剪切成0.5×0.5cm的小块，得到脱毛的牦牛皮，置于-18～-20℃冷冻保存；

步骤2，牦牛皮的脱脂，即将步骤1脱毛的牦牛皮置于5wt％～20wt％正丁醇的水溶液中(即在溶液中，正丁醇的质量百分数为5—20％)，在溶液温度为0～10℃下连续搅拌4～48h，得到脱脂的牦牛皮，所述步骤1脱毛的牦牛皮与正丁醇的水溶液的质量比为1：(5～20)；

步骤3，牦牛皮的除杂蛋白，即将步骤2脱脂的牦牛皮置于碱液中，在0～10℃下连续搅拌5～48h，得到除杂蛋白的牦牛皮，其中所述碱液为0.01～0.2M的氢氧化钠水溶液或者氢氧化钾水溶液，所述步骤2脱脂的牦牛皮与碱液的质量比为1：(15～40)；

步骤4，牦牛皮的脱酸，即将步骤3除杂蛋白的牦牛皮置于酸液中，在室温20—25℃搅拌浸泡2～15h，再反复水洗牦牛皮至pH值达到5～7，得到脱酸牦牛皮，其中所述酸液为质量百分数为0.01％～2％的盐酸水溶液或者硫酸水溶液，所述步骤3除杂蛋白的牦牛皮与酸液的质量比为1：(5～15)；

步骤5，对脱酸牦牛皮进行抽提，即将步骤4脱酸的牦牛皮置于70～90℃的热水中搅拌抽提，所述步骤4脱酸的牦牛皮与热水的质量比为1：(5～15)，在搅拌抽提过程中每隔30～120min进行过滤并更换热水继续进行搅拌抽提，直至牦牛皮全部溶解，每次过滤得到的滤液汇总成为水抽提产物；

步骤6，将水抽提产物制备明胶粉末，即将步骤5得到的水抽提产物(即牦牛皮全部溶解后得到的全部胶液)在4000～10000g离心力下离心2～20min，收集上清液，利用旋转蒸发仪进行浓缩后干燥得到明胶粉末，2～4℃储存备用；

步骤7，对明胶粉末进行酶解，即将步骤6制备的明胶粉末溶于0.01～0.2M的磷酸钠缓冲溶液中以得到质量百分数4～10％的明胶水溶液，加入复合酶进行酶解，加酶量为底物(即明胶粉末)重量的0.1～2％，酶解温度为35～55℃，酶解时间4～8h，pH值为7；酶解后置于75～90℃灭酶处理5～15min；灭活后，在4000～10000g离心力下离心15～40min，保留上清液；

步骤8，将步骤7制备的上清液进行超滤以得到所需分子量的胶原蛋白溶液，其中选择使用超滤膜进行超滤，分别使用分子量为10kDa及3000Da的超滤膜进行超滤，得到分子量为小于10kDa和3000Da的胶原蛋白溶液。

2.根据权利要求1所述的牦牛皮降血压胶原蛋白多肽，其特征在于，在步骤2中，所述正丁醇浓度优选10—20％，温度为5～10℃，时间为20～40h；在步骤3中，所述碱液为氢氧化钠的水溶液，摩尔浓度为0.01M，除杂温度为2～6℃，时间为15—40h；在步骤4中，所述酸液为质量百分数为0.01％～2％的盐酸水溶液，在室温20—25℃搅拌浸泡10～15h。

3.根据权利要求1所述的牦牛皮降血压胶原蛋白多肽，其特征在于，在步骤6中，在浓缩后进行的干燥为冷冻干燥或者喷雾干燥。

4.根据权利要求1所述的牦牛皮降血压胶原蛋白多肽，其特征在于，在完成步骤8的超滤之后，进行离子交换层析、凝胶过滤层析和高效液相色谱等方法进行分离纯化多肽，浓缩干燥，以得到胶原蛋白多肽的粉末。